111116一站式GST标记蛋白质微量纯化套装使用手册V1点0.doc

蛋白质研究CAT#:111116A-20CAT#:111116B-20常温运输和保存,溶菌酶、Benzonase和PMSF需要低温运输,-20℃保存一站式GST标记蛋白质微量纯化套装one-StopGST-:944823743,449730601(销售),948393554(技术),:010-80638853,010-62200278(销售),**********(技术),order@原理及特点重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶(GlutathioneSTransferase)能提高重组蛋白的水溶性,所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合,并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立,是目前分离纯化GST标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的,具有下列特点:一站式套装,含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱,用户只需要提供表达GST标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可,非常方便。专一性强,一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。只能在非变性条件下使用,只可用于纯化没形成包涵体的GST标记蛋白。每次可以处理20mL的表达菌液,适合初步筛选和鉴定。提供2mL谷胱甘肽-Agarose介质,可吸附5-10mgGST标记蛋白质。本介质可以反复使用多次。规格及成分成份20次小盒包装A型(111116A-20)20次小盒包装B型(111116B-20)谷胱甘肽-Agarose介质2mL2mL10×PBS缓冲液(CAT#:100215-100)100mL100mL溶液A1mL无GST洗脱缓冲液成分一25mL25mLGST洗脱缓冲液成分二约80mg约80mg溶菌酶(20KU/mg)无30mgBenzonase(2U/uL)无20uLPMSF(10mg/mL)(带筛板)1套1套使用手册1份1份运输及保存常温运输和保存,溶菌酶、Benzonase和PMSF需低温运输。收到货后,介质需4℃保存,溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存,有效期一年自备试剂超纯水使用方法注意:每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照,在下面描述中就不再提醒。本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌,注意防止污染。GST洗脱液的配制方法是将约80mgGST洗脱液成分二全部加入到GST洗脱液成分二中,摇晃直到干粉全部溶解即得GST洗脱液,分装成小份放-20℃保存,每次用一管。一:重组蛋白的表达和细菌收集37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=-。,30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。4℃5000g离心10分钟收集20mL表达菌液,弃上清。用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀,4℃5000g离心10分钟,弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。二:细胞裂解如果用本产品A型,用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL1×PBS缓冲液+50uL溶液A+25