分子生物学课件.ppt

基因操作原理及相关技术Parttwo:1基因操作(genemanipulation)基因工程(geneengineering)遗传工程genecloningmolecularcloning基因操作的核心部分为重组DNA技术。bination1定义:对目的基因进行体外重组,再将重组分子导入受体细胞,使这个基因在受体细胞中复制、转录、翻译表达的过程。克隆(clone):n,无性繁殖系及其后代。基因完全相同;v,指从同一祖先产生这类同一的DNA分子群或细胞群的过程。(Gene,cell,个体)20世纪70年代发展起来的遗传学的一个分支学科。4理论上三大发现:Avery肺炎双球菌转化实验:证实了遗传物质的本质是DNA(1944年)Watson和Crick:提出DNA双螺旋结构模型(1953年)Nirenberg等:确定了遗传信息的传递方向(1961-1966年)DNARNA蛋白质5技术上三大发明:工具酶:分子手术刀,切割与缝合基因,包括限制性内切核酸酶、连接酶、DNA聚合酶、RNA聚合酶等,对DNA或RNA进行各种各样的修饰。载体(vector,vehicle):本意是媒介体,在基因工程上指能将目的基因导入宿主细胞的DNA分子。逆转录酶(reversetranscription,RT):打破了中心法则,使真核基因制备成为可能,RT-PCR。RNADNA6genemanipulation过程1、目的基因的获取(PCR,genelibrary);2、载体(vector)的选择与构建(工具酶等);3、目的基因与载体连接,构建重组DNA分子;4、重组DNA导入受体细胞,转化子筛选;5、受体细胞中目的基因的功能表达。7基因工程的基本过程分(合成)、切、连、转、选、鉴8重组DNA技术的意义打破了自然种的界限真核/原核生物间基因的交流对生物进行定向改造基因治疗(基因矫正/添加,RNAi)基因工程药物(生长激素,细胞生长因子,重组疫苗等)9组织纤溶酶原激活物(tissueplasminogenactivator,tPA)Oneexample---10