菠萝蛋白酶提纯和化学修饰对其活性的影响性.docx

菠萝蛋白酶提纯和化学修饰对其活性的影响性.docx菠萝蛋白酶提取纯化及化学修饰对其活性的影响一、实验目的1、掌握菠萝蛋白酶的提取和纯化方法2、研究菠萝蛋白酶的稳定性3、掌握菠萝蛋白酶的化学修饰并对修饰酶与未修饰酶的活性比较二、实验原理菠萝蛋白酶(Bromelain,)是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合的半胱氨酸巯基蛋白水解酶。菠萝蛋白酶属于糖蛋白,分子量约为33000D,,白色至浅棕黄色无定形粉末,溶于水。水溶液无色至淡黄色,有时有乳白光,不溶于乙醇、***仿和***。菠萝蛋白酶是典型的巯基蛋白酶,能分解蛋白质,肽,酯,酰***。它的水解蛋白的活性比木瓜蛋白酶的活性高十倍以上,因此有着广泛的用途。它作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化、啤酒澄清,还用于干酪、明胶、水解蛋白酶的生产。在医药上它可用于生物体内溶解纤维蛋白及血凝块,因此可用于治疗水肿及多种炎症;它能迅速溶痂,对正常组织无害,不影响植皮,适用于中小面积深度烧伤的治疗。菠萝蛋白酶的最适温度范围比较稳定,最稳定范围是55℃~65℃。,呈现中性。金属盐离子中NaCl、KCl对酶活的影响不是很大,较高浓度的MgCl2、CaCl2对菠萝蛋白酶单宁复合物有一定程度的抑制作用,尤其在浓度较高的情况下对菠萝蛋2+白游离酶酶活的影响更大。Zn的作用中以醋酸锌的作用更为显著,极低的浓度即能促使菠萝蛋白酶的酶活性明显提高。较低浓度的ZnCl2也能使酶的稳定性有所提高。维生素C、半胱氨酸、硫代硫酸钠、2-巯基乙醇是菠萝蛋白酶的稳定剂,都能使酶分子中巯基基团维持还原态,能够作为还原剂来提高酶活力。%的苯甲酸钠即能使氧化脱氢酶的活性得到抑制,对酶起到保护作用。对酶活有影响的金属离子,EDTA能通