细胞活化与细胞复苏.doc

,请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形,若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养,或立即冷冻保存(置于–70°C,隔夜后,移到liqN2)。细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。:℃%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。、吸管、培养瓶等等。:。,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。:,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。:用架盘天平平衡后,放入离心机中3000r/:。,吹打制成细胞悬液。:细胞浓度以5×105/ml为宜。,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。初学者易犯错误:1水浴锅未预热或者未预热到37℃。,导致传热不佳,使融化时间延长。,导致离心机损坏和细胞丢失。,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。(另:冷冻细胞解冻程序)、血清种类和其它指定之成份和比例,制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类,若因实验需要,必须有所不同时,务必以缓慢比例渐次改变培养基组成,确定细胞适应后,方进行所需之实验。(fetalbovineserum,胚牛血清),CS(calfserum,小牛血清)和HS(horseserum,马血清),对细胞而言差异极大,请务必依据细胞株资料单指定之血清种类培养之。°C水槽中回温,回温后喷以70%酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。取出冷冻管,立即放入37°C水槽中快速解冻,水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿,否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化后,以70%ethanol擦拭冷冻管外部,移入无菌操作台内。,于无菌操作台内取10ml培养基加至T25或T75flask中。取出已解冻之细胞悬浮液,缓缓加入T25或T75flask内之培养基,混合均匀,放入37°C,5%C