车前草中桃叶珊瑚苷的提取及对细胞氧化损伤保护作用-最终稿.doc

桃叶珊瑚苷提取及对细胞氧化损伤保护作用韩震李光坤宿州学院化学与生命科学学院摘要本研究主要利用色谱的方法,对车前草中桃叶珊瑚苷进行了提取,并进一步测定其对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。经过一系列的提取和分离,薄层色谱检测,最终获得白色无定形的桃叶珊瑚苷300mg。利用过氧化氢建立直接的氧化损伤PC12细胞凋亡模型,利用MTT法检验评价桃叶珊瑚苷对细胞的保护效应。结果表明,桃叶珊瑚苷增强了细胞活力并且能够很好的抑制H2O2对PC12细胞的毒性。关键词桃叶珊瑚苷;色谱分析;氧化损伤中图分类号:文献标识码:文章编号:1引言桃叶珊瑚苷是一种广泛存在于自然界许多植物种属中的环烯醚萜类化合物,具有通便、护肝、抗微生物、止痛、抗肿瘤、抗炎、抗凋亡等多种生物学活性[1-4]。,味苦,易溶于水、乙醇、甲醇,不溶于***仿、***、石油醚等溶剂中。自发现天然植物种属中存在有桃叶珊瑚苷以来,相继在车前草科(Garryaceae)、玄参科(Scrophulariaceae)、球花科(Globulariaceae)、杜仲科(miaceae)等植物种属中发现了此化合物,其中以车前草和杜仲中的含量很高。桃叶珊瑚苷的主要来源为天然植物中提取,也有人利用组培的方法从杜仲的愈伤组织培提取桃叶珊瑚苷。近年来,由于桃叶珊瑚苷具有分子量小、水溶性高,易于透过血-脑屏障等优点,被广泛的应用于脑神经元细胞损伤保护的研究[5],大量的研究结果表明,其保护氧化损伤的作用机制可能是通过保护细胞免受氧化损伤来实现的。因此,本研究采用色谱联合大孔吸附树脂和柱层析等方法从车前草中分离提出桃叶珊瑚苷,并进一步进行其对细胞活性保护作用研究,为其应用临床研究奠定前期理论基础。-185超纯水器(美国密理博公司);BP211D型电子天平(sartorius);酶标仪(美国Thermo公司);MAXIDRY-LYO冷冻干燥系统(丹麦Heto-Holten公司);旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。大孔树脂(天津农药股份有限公司树脂公司);柱层析用硅胶(青岛海洋化工厂);车前草药材(宿州市中药材批发公司);桃叶珊瑚苷对照品(纯度≥99%,美国Sigma公司)和MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenylterazoliumbromide)(美国Sigma公司);其他试剂均为分析纯。,粉碎机粉碎,用10倍体积分数为70%的乙醇浸泡过夜,超声提取3次,每次30min,将提取液合并,低温真空回收,置水浴锅上浓缩,离心后取上清液,注入预处理过的大孔吸附树脂,蒸馏水洗去糖等杂质,用体积分数为10%的乙醇溶液洗脱,250mL为一个馏分收集洗脱液,薄层色谱检测,收集合并含目标点的馏分。馏分减压浓缩,将浓缩物进行硅胶柱层析,收集合并含目标点的馏分,减压浓缩,如此重复硅胶柱层析,得到层析液,收集、冷冻干燥,最后得到白色无定形粉末300mg。,,利用95%的乙醇溶液,将其配成浓度梯度分别为14mg/ml、7mg/