革兰氏染色的机理和步骤.doc

革兰氏染色的机理和步骤机理:G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性,抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。G+的CW:肽聚糖层厚,脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水,孔径减少,透性降低,不易脱色,呈初染得蓝紫色。G-的CW:肽聚糖层薄,脂质含量高。乙醇脱色时,类脂被乙醇溶解,透性升高,细胞被复染显红色。步骤:①涂片:在干净的载玻片上滴一滴水,用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。②固定:将玻片靠近酒精灯火焰,蒸干水分,但不要烤焦。③初染:用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。④媒染:以碘液媒染1min,水洗,吸干水分。(细胞内形成结晶紫与碘的复合物,增强相互作用)⑤脱色(关键步骤):以95%的乙醇脱色30s,应适当振荡均匀,是乙醇脱色完全。⑥水洗,吸干。⑦复染:??(第2张)复染30s,水洗吸干。⑧干燥镜检。用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差,以及皮层的离子强度很高,这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分,其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水,正是这种失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应,并说明如何能够维持微培PH稳定。答:培养过程中,由于营养物质被分解利用,代谢产物的形成与积累,会导致PH变化。(第2张中的图)还与培养基的C/N比有关,C/N高,经培养基后PH显著下降,C/N低,经培养基后PH明显上升。PH调节:①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐,K2HPO4呈碱性,KH2PO4酸性,只在一定的PH范围内调节(--)②大量产酸的菌株,加CaCO3调节,CaCO3难溶于水,不会使培养液的PH过度增加,但可不断中和微生物产的酸。③培养液中存在天然的缓冲系统,如AA,肽,Pr均属***电解质,也起缓冲的作用。④过酸:治标------加NaOH、Na2CO3中和,治本-----加适量氮源:NaNO3、Pr、NH3·H2O;增加通风量。⑤过碱:治标-----H2SO4、HCl中和,治本----加适量碳源:G类,脂类;减小通风量。抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株?抗生素法(青霉素法):适用于细菌。原理:青霉素抑制肽聚糖链间的交联,组织了合成完整的CW,野生型B处于正常生长繁殖,所以对青霉素敏感,可被抑制或杀死;营缺B在基本培养基上休眠状态存活下来,从而达到浓缩营缺型目的。制霉菌素法适用于真菌,其可与cm上?(第1张)醇作用,引起cm损伤,因为它只能杀死生长繁殖着的真菌,所以......菌丝过滤法:基本培上,野生型霉菌,?菌的孢子能萌发并长成菌丝,而缺型孢子一般不萌发,或不能长成菌丝,因此培养一段时间后,用灭菌脱脂棉或滤纸滤去菌丝,收集滤液,重复数遍后可除去大部分野生型,从而……4、生产蛋白酶的枯草芽孢杆菌发生遗传变异,使得产量性状下降,你如何解决?写出具体实验方案。答:将一定量的枯草芽孢杆菌培养液,做一定浓度的稀释,涂布在含有酪素蛋白质的基本培养基上,37°C培养一段时间后,取出培养基,观察单菌落形成的透明圈大小,取透明圈直径与菌落直径之比较大的菌落,挑取培养做进一步的鉴定,即可得到高产蛋白酶的枯草芽孢杆菌。5、以磺***为例,说明化学治疗机的作用机制。答:机理:磺***是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物,(磺***类药物取代对氨基苯甲酸,干扰叶酸的合成,抑制了转***反应,导致代谢紊乱,从而抑制B生长),磺***的抑菌作用是因为许多细菌需要自己合成叶酸而生长,磺***对人体细胞无毒性,因为人体缺乏从对氨基苯甲酸合成叶酸的相关酶-----二氢叶酸合成酶,不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸,而必须直接利用叶酸为生长因子进行生长。(磺***类----与正常代谢产物竞争酶的活性中心,干扰了酶的功能,从而干扰代谢的正常进行)。画出生长曲线。(第1张)微生物的共性?哪个最基本?答:①体积小,面积大(最基本)②吸收多,转化快③生长旺,繁殖快思适应性强,易变异⑤分布广,种类多。比较G+,G-B在CW结构,组成,对溶菌酶,青霉素的敏感性4方面的异同点。结构成分对溶菌酶青霉素G+单层,组分简单,厚肽聚糖(90%)磷壁酸(10%)敏感生长期的G+对其敏感G-多层,组分复杂,薄内壁层:肽聚糖外膜:脂多糖,磷脂,脂蛋白敏感不敏感表型延迟现象?如何克服?答:表型延迟:表型的改变落后于?(第四张)改变的现象,分为①分离性延迟;突变的?经DNA复制和细胞分裂后变成纯合状态,表型才能表现出来。②生理性延迟;杂合状态→纯合状态,仍不能表现出来,(如营缺型)通过中间培养(CM,培养过夜),可使突变?稳定下来,克服表型延迟。培养B常用的斜面培养基是什么?简述配制程序。答:牛肉膏蛋白胨培养基①称量;按配方依次准确称量②融化:取少量水