免疫组化在血液肿瘤病理诊断中的应用及意义(一) IHC方法相对简单,但从取材到发报告之间环节较多,任何环节的疏忽都可能造成检测结果偏差,甚至导致漏诊、误诊。除IHC染色常规注意事项外,血液肿瘤标本的检测还有其特殊性。 ,主要是淋巴结、脾脏和骨髓组织。与其它组织相似,造血细胞表面抗原不同其稳定性会有差异,从而对固定剂的耐受性不同。组织固定的原则,是采用10%中***尔马林作为固定剂,固定时间最好不超过24小时。(1)淋巴结:取材后迅速固定,待组织表面变硬即可修块。以淋巴结大小为直径,厚度不超过3mm,以使组织得到充分的固定。如淋巴结中有淤血、坏死成分,应尽量除去。组织制片中的每个步骤都应严格掌握,以免破坏组织的抗原活性。(2)脾脏:脾脏组织较大,应注意多点取材;脾脏又是贮血器官,含血量多,取材时应尽量除去积血;取材大小以2×2×,取材后尽快固定。在多块标本中,病理医师应根据HE切片,挑出病变明显的1~2块作IHC染色。(3)骨髓组织:特点为组织小,主要为骨质,造血细胞充斥于骨小梁之间。在组织制片的每个步骤都应相应缩短时间。骨髓组织制片需要脱钙,酸性脱钙液对抗原活性有影响,常规采用的2%***,脱钙不应超过3小时。EDTA脱钙液偏碱性,比较温和,效果较好,只是时间长,约需24~48小时。(4)骨髓涂片:某些情况下当骨髓组织取材不好,如太小或组织为骨皮质、血凝块等不能进行石蜡包埋制片时,可用骨髓涂片代替。但注意骨髓涂片不能太厚,最好不混血。涂片稍干后用甲醇:***(1:1)固定90秒后染色。涂片不能在室温下久存。(5)外周血涂片:某些特殊情况不能采用穿刺骨髓取材时,可用外周血涂片代替。前提是外周血有核细胞总数必须较多,结果才相对可靠,固定同骨髓涂片。(6)组织印片:当疾病诊断和分型必需的标记物不能用于石蜡切片时,可用组织印片来补救。将新鲜软组织取材后,按取材大小平放于干净的载玻片上,轻压,然后垂直取下标本,组织表面的细胞即印在玻片上,风干,固定同骨髓涂片。组织印片与冰冻切片相似,由于形态不好,除特殊情况外,临床上尽量不用。 IHC染色方法很多,如免疫荧光、免疫酶标、免疫金标。免疫酶标是以酶标记的抗体与组织或细胞作用后,加入酶的底物生成有色产物,通过光镜对细胞表面或细胞内抗原进行定位。免疫酶标以其标记酶不同又分为标记过氧化物酶(HRP)法,如ABC、SP及相应二步法;标记碱性磷酸酶(AP)法,如SAP及相应的二步法。葡萄糖氧化酶(GOD)分子量较大,具有较多的氨基酸,在标记时易形成广泛的聚合,影响酶活性,现已较少使用。目前最常用的是SP、SAP及二步法。脾脏、淋巴结切片IHC染色可采用SP及相应的二步法,DAB显色。此法敏感性高,阳性定位准,保存时间长。而骨髓中的红细胞、粒细胞、单核组织细胞含有丰富的内源性HRP、H2O2处理效果不理想,可造成非特异着色而影响结果的分析。故在做骨髓切片、骨髓涂片、外周血涂片染色时,我们常选择AP标记的SAP及相应的二步法,核固红或BcLP/NBT显色。此系统敏感性尚好,但定位不及SP法,保存时间较短。 。血液系统肿瘤免疫分型主要用CD系列的白血病分化抗原。考虑到患者对检测费用的承受能力,在病理诊断中,主
免疫组化在血液肿瘤病理诊断中的应用及意义(一) 来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.