特殊染色法.doc

抗酸杆菌染色试剂配制:碱性品红乙醇液:碱性品红5g,无水乙醇100ml5%苯酚水溶液:苯酚(稍加温使共溶解)5ml,蒸馏水95ml苯酚碱性品红液:碱性品红乙醇液1ml,5%苯酚水溶液9ml20%硫酸水溶液:浓硫酸20ml,蒸馏水80ml汽油松节油液:航空汽油(也可为普通汽油)1份,松节油1份染色程序:切片用汽油松节油脱蜡2次,每次5-10min。不经乙醇洗,只用纱布将切片周围余液擦干。流水稍洗。滴入苯酚碱性品红液,于室温下染15—30min。流水去多余液体。用20%硫酸水溶液分化至适当为止(一般需1—5min)流水充分冲洗。用Mayer苏木精液浅染细胞核。洗流水冲洗10—15min。用风扇把切片吹干,随即二甲苯透明,中性树胶封固。结果:抗酸杆菌(包括麻风杆菌和结核杆菌)呈鲜红色,胞核呈蓝色。奥新兰过碘酸雪夫代染色简称(AB—PAS染色)(溶液配制)1,%的奥辛兰醋酸液:,蒸馏水97ml,冰醋酸3ml2,1%过碘酸水溶液,schitf代试剂及亚硫酸冲洗液配发同。(染色方法)切片按常规脱蜡水洗,再入蒸馏水洗。%或1%奥新兰醋酸液中10—30分钟。用蒸馏水充分洗,至少洗4次。1%过碘酸水溶液氧化5—10分钟。用蒸馏水从分洗,至少3—4次。Schiff代试剂染10—30分钟。直接用亚硫酸冲洗3次,每次2分钟。(有固定的作用,把多余的schiff试液洗净)流动自来水洗5分钟后蒸馏水洗。苏木素染核。必要时盐酸究竟稍分化后充分用自来水洗。95%酒精,无水酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固。(结果)酸性粘多糖呈靛兰色,中性粘旦白呈鲜紫红色或品红色,中性及酸性粘蛋白混合物呈紫兰色。软骨紫蓝核呈蓝色。改良Hale胶状铁染色液的配制和应用(溶液配制)29%***,蒸馏水250ml将蒸馏水置于烧杯内煮沸,然后滴加***化铁不断搅动直至溶液变成暗红色。停止加热,将冷却后使用。2%亚铁***化钾水溶液和2%盐酸水溶液各25ml过滤后使用。注:1%中性品红的配制,中性品红1g用5%硫酸铝溶1N盐酸75ml(染色步骤)石蜡切片脱蜡至蒸馏水。3%新配制好的醋酸水溶液中处理切片5min。用胶状铁染液染色40—60min3%醋酸水溶液冲洗3—4次,每次两分钟。滴入2%亚铁***化钾盐酸混合溶液处理10min。蒸馏水洗3—4次。用1%中性红溶液复染3—5min。稍水洗。梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。网状纤维染色(网织染色)氢氧化银氨液浸染法(I)1,实际配制:(1)Gordon—Sweets银氨液:用小量杯盛10%***银水溶液2ml,逐滴加入氢氧化铵,边滴边摇动容器。先出现沉淀物,继续滴入氢氧化按至所形成的沉淀物恰好溶解。加入3%氢氧化钠溶液2ml,在此行程沉淀。继续滴入氢氧化氨,直至沉淀物再次恰好溶解。最后加蒸馏水至40ml,配好后用棕色砂塞瓶盛装,置于4摄氏度冰箱内保存,使用前取出恢复到室温。(2)酸化高锰酸钾水溶液:,蒸馏水100ml乙液:%,蒸馏水100ml()甲乙两液分瓶盛装,临用前等份混合。(3)2%草酸液:草酸2g,蒸馏水100ml(4)2%硫酸铁铵液:硫酸铁铵2g,蒸馏水100ml(5)4%中性甲醛液:甲醛(40%)10ml,蒸馏水90ml。碳酸钙加至饱和,用时取其上清液。(6)核固