HPV与色素改变性皮肤疾病之间的关系研究.pdf

分类号 R71 密级公开
U D C
硕士学位论文
HPV 与色素改变性皮肤疾病之间的
关系研究
学位申请人: 陈国仙
学科专业: 妇产科学
指导教师: 肖长义教授
二○一二年五月
A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for the
Degree of Master of Medicine
Study on the Relation of HPV and the Pigment Alteration
Disease of Skin
Graduate Student: Chen GuoXian
Major: Gynaecology and Obstetrics
Supervisor: Prof. Xiao CHangyi
China Three Gorges University
Yichang, 443002,
May 2012
三峡大学硕士学位论文
三峡大学学位论文原创性声明
本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作
所取得的成果,除文中已经注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经
发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明
确方式标明,本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。
学位论文作者签名:
日期:
三峡大学研究生知识产权承诺书
本人承认:我作为三峡大学硕士研究生在校学****期间,在导师指导下,依据研究
工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。
本人承诺:我有义务维护三峡大学的知识产权,凡是以我本人学位论文内的全部
或部分研究成果,或实验数据为基础所形成的研究论文及成果,无论是以何种形式刊
发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励,均以三峡大学为第一作者单位或完成单位,
并事先征得导师或学校相关部门的同意。
我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。
学位论文作者签名:
日期:
I
三峡大学硕士学位论文
内容摘要
目的:本课题研究目的是在前人的研究基础之上,收集脂溢性角化病和色素痣的
临床标本,提取总 DNA,应用 HPV 特异型和通用型引物对进行扩增,检测标本中某
些型别 HPV DNA 的存在与否,制作石蜡切片,应用两种针对 HPV L1 蛋白的抗体进
行免疫荧光试验,检测标本中 HPV L1 蛋白的存在与否,从基因和蛋白两个水平研究
脂溢性角化病和色素痣皮损中 HPV 的存在情况,及其存在与病损的发生有无相关性。
方法:(1)收集脂溢性角化病和色素痣石蜡标本,确定其临床诊断和病理诊断,
将同一标本分成两部分,一部分以 4um 厚连续切片,捞片,另外一部分以 10um 厚连
续切片,5 片,装入 的 EP 管中;(2)对所有标本提取总 DNA,采用 PCR 方法
检测 HPV 病毒基因的存在与否,确定 HPV DNA 阳性检出率;(3)对相同的所有标本
以本课题组所制备的兔抗 HPV L1 多克隆抗体及购买的小鼠抗 HPV L1 单克隆抗体为
一抗进行免疫荧光检查,检测组织中 HPV L1 蛋白的存在情况及阳性检出率;(4)采用
统计学软件,综合分析以上实验结果,确证脂溢性角化病和色素痣中 HPV 的存在情
况,探讨 HPV 在上述疾病发病机制中所发挥的作用。
结果:(1)共收集脂溢性角化病石蜡标本 46 例,色素痣 52 例;(2)PCR 中,对所
有标本提取总 DNA 后均进行β-globin 基因扩增,脂溢性角化病阳性者 38 例,色素
痣阳性者 44 例,对所有β-globin 基因扩增阳性的标本进行 HPV16 E6,HPV18 E6
扩增后再进行 HPV L1 通用型引物对 MY09/11,GP5+/6+扩增,每个引物扩增重复两
遍,结果 38 例 SK 中有一例 HPV16 DNA 弱阳性,检出率为 %,其余标本全部为
阴性;(3)脂溢性角化病标本进行免疫荧光检测,兔抗 HPV L1 多克隆抗体为一抗时,
阳性部位主要在上皮未角化部,阳性者共 24 例,HPV LI 蛋白检出率为 %,鼠
抗 HPV L1 单克隆抗体为一抗时,阳性主要表达在上皮角化层及真皮角化珠内,阳性
者共 20 例,HPV LI 蛋白检出率为 %。色素痣标本进行免疫荧光检测,兔抗 HPV
L1 多克隆抗体为一抗时,阳性主要表达在上皮未角化部及汗腺内,阳性者共 22 例,
HPV LI 蛋白检出率为 %