苏云金杆菌.doc

从苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,简称Bt菌)HD-1中提取Bt杀虫蛋白,作为抗原免疫家兔,得到高效价的抗血清。利用抗体-抗原-酶标抗体反应,建立了酶联免疫学测定方法(ELISA法),可定量检测转Bt杀虫蛋白基因植物组织内Bt蛋白的含量。用建立的ELISA方法检测了转Bt杀虫蛋白基因烟草(Bt烟草)的叶片和转Bt杀虫蛋白基因棉花(Bt棉)的叶片、花器、铃和蕾等部位,并同生物测试法相比较,发现两种方法有很好的相关性。同生物测试法相比,ELISA法具有检测周期短,操作简便的优点,并且可以精确定量。Bt杀虫蛋白基因已被转入棉花、烟草、杨树和马铃薯等多种植物,其中一些已进入中试和大规模商业化种植阶段,在育种中,ELISA法可提供简便易行的检测手段。用ELISA法检测Bt棉不同时期不同器官杀虫蛋白含量,差异显著。叶和花瓣杀虫蛋白含量最高,铃和蕾次之。整个生长季中,杀虫蛋白的含量在盛花期较高,以后就开始下降。在生长的后期,各器官杀虫蛋白的含量都降至很低的水平,杀虫的效果也明显减弱。研究的结果对于棉铃虫的综合防治具有重要的指导意义。研究还发现,在种子萌发的初期,杀虫蛋白就开始表达,并随着时间的推移,表达量逐渐提高。而在未萌发的种子中,杀虫蛋白含量很低。对棉叶提取液进行超滤处理,ELISA的检测结果显示,在胞浆中杀虫蛋白含量很低,而在膜系统处理液中含量较高,初步推测杀虫蛋白可能结合于膜系统上。关键词棉铃虫;Bt棉;Bt杀虫蛋白;ELISA;生物测试AbstractExtractingBtinsecticidalproteinfromBacillusthuringiensisHD-1andimmunizingrabbits,,antigen,andenzyme-markedantibody,,flowers,otton,paredwithbioassay,ELISAmethodhasthemeritsofspendingshortertime,,suchascotton,o,potato,,,,’ssuper-filteringsamplebyELISA,(HelicoverpaarmigeraHubner);Bt(Bacillusthuringiensis)cotton;Btinsecticidalprotein;Enzyme-linkedimmunosorbentassay;Bioassay前言苏云金杆菌(BacillusthuringiensisBerliner)是一种革兰氏阳性土壤芽孢杆菌。这种细菌可以产生几种杀虫的代谢物(Lüthyetal.,1985).α-外***(α-exotoxin)是一种蛋白质,将其注射到昆虫和小鼠体内具有毒性(Krieg,1971)。β-外***(β-exotoxin,orthuringiensin)是由几个隔离种群的