基于生物素亲和素系统的压电免疫传感器检测相思子毒素研究.doc

基于生物素亲和素系统的压电免疫传感器检测相思子毒素研究
作者:穆晞惠,周志强童朝阳刘冰郝兰群
STRONG【摘要】/STRONG利用生物素亲和素系统的放大作用和纳米金质量扩增效应,建立了压电免疫传感器检测相思子毒素的新方法。首先在石英晶体的金电极上依次组装二巯基丙酸、EDC和NHS进行表面修饰,然后通过亲和素固定生物素标记相思子毒素多抗来制备敏感膜,利用纳米金的质量扩增效应设计了一种“毒素纳米金标记单抗”复合物,成功实现了对相思子毒素的检测,提高了传感器灵敏度和重现性。~5mg/L;回归方程为Δf=+(r=,n=10,);·L/mg。
STRONG【关键词】/STRONG压电免疫传感器,生物素亲和素,相思子毒素
STRONG1引言/STRONG
相思子毒素(Abrin)是从豆科植物相思子种子中分离的一种细胞毒蛋白,毒性超过蓖麻毒素。其结构、作用机理与蓖麻毒素(Rcin)类似,中毒早期无特殊症状和病变,待发现症状后,已难以Medicine治疗[1~5]。因此,建立一种响应快速、灵敏的检测方法极为必要。曾有人采用放射免疫、酶联免疫检测等方法实现了对相思子毒素的检测,但检测过程繁琐、耗时。生物素
亲和素系统(Botinavidinsystem,BAS)是一种生物放大系统,具有灵敏度高、特异性强以及简便、经济、快速等特点。本研究利用BAS系统的放大作用和高稳定结合性、多克隆抗体的强富集力以及纳米金标记单克隆抗体的高度特异性、质量扩增效应与压电传感器芯片技术相结合,建立了一种可实时监控、操作简单、响应快速、灵敏度高的检测方法,为临床诊断、环境监测、食品卫生检验、法医学鉴定及生物反恐等应用领域提供技术基础和参考依据。
STRONG 2实验部分/STRONG

压电免疫传感器装置(自制)。Abrin标准品、Abrin单抗和多抗、生物素标记Abrin多抗、金标Abrin单抗、纳米金溶胶均由本实验室制备;生物素化N羟基琥珀酰亚胺酯(BNHS)、聚乙二醇(PEG20000)、3,3′二巯基丙酸(DDPA)、N琥珀酰亚胺(NHS)、亲和素(Avidin)、1乙基3(3二甲氨丙基)碳二亚胺(EDC)、乙醇胺均购自Sigma公司;Piranha液(V(H2SO4)∶V(H2O)=3∶1);实验用水为二次蒸馏水。

、金标单抗制备及效价测定参照文献[6,7]制备生物素标记Abrin多抗和金标Abrin单抗,用间接ELISA法测定效价。
;用水清洗后加入100μL100mg/LEDC和100μL100mg/LNHS,反应20min;清洗后加入100μL100mg/L亲和素反应1h;清洗后加入100μL1mol/;HCl缓冲液(),稳定后加入10μL生物素标记Abrin多抗,至频率稳定。
金标Abrin单抗复合物的制备将10μL250mg/