苏云金杆菌NU-.doc

Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuse薂莂膃薀螆芁薈苏云金杆菌NU-1、NU-2不同配比混合发酵研究蚅蒂袇螇蒈蚅肈王丽红,郭爱莲,方芳莄蒂羂膈袆莁肄(西北大学生命科学学院,陕西西安710069)膃薁芈蕿蚈肃薂摘要:通过对苏云金杆菌NU-1、NU-2的3种配比(接种比例NU-1:NU-2分别为1:1,1:3,3:1)混合发酵结果得出:NU-1、NU-2的混合培养与纯培养相比,混合培养不仅有利于菌数的正增长,(NU-1:NU-2接种比例为3:1)效果最好,在发酵41h菌数可达到68×108个/mL,伴孢晶体率>90%,,%.羂蚁蚁羀肆蒀羀关键词:苏云金杆菌;混合发酵;生长曲线;pH值;晶体蛋白羅螁蒅肇螈袅蒇中图分类号:Q93-335文献标识码:A文章编号:1000-274X(2004)0094-5螄袁蒀蒈芆薀袄20世纪60年代以来,由于化学农药的环境污染、害虫普遍产生抗药性等原因,,微生物杀虫剂的研究和利用发展很快,苏云金杆菌BT(Bacillusthuringiensis)制剂是当前应用最广、最有效的一种细菌生物胃毒杀虫剂,因其对双翅目Dipter、鳞翅目Lepidoptera、鞘翅目Coleoptera、膜翅目Hymenpotera、同翅目Homoptera和直翅目Orthoptera等昆虫有特异性毒杀作用,同时对螨类、线虫等多种害虫显示杀虫活性而倍受人们关注[1~3].其杀虫作用主要是在生长过程中,菌体能够产生一种或几种由杀虫晶体蛋白组成的伴孢晶体,而且各基因编码的伴孢晶体产物都有杀虫特异性[4],在培养特征,晶体蛋白(ICPs)组成及杀虫谱方面,不同菌株存在很大差异[5].近年来,有益微生物的混合发酵技术日臻成熟,通过对不同苏云金杆菌菌株的混合培养以达到菌株间的优势互补,从而提高杀虫效果,,如何才能使二者不仅在生长繁殖过程中互相促进,而且所产生的晶体蛋白组合表现出协同杀虫效应,-1和NU-2是从自然界分离的杀虫效果较好、,其生长曲线,pH值及晶体蛋白含量的变化, ***羅袆NU-1、NU-%,蛋白胨1%,%,~2%,~%,%,%,~%,%,%,%,(NH4)%,%,~-1、NU-2各挑一环接种于牛肉膏蛋白胨培养基上,30℃(采用稀释混合平板法进行试验)羃螀薆荿螆莄罿1)将NU-1菌悬液与45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基做混合平板,上点接NU-2菌种,30℃培养24~)将NU-2菌悬液与45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基做混合平板,上点接NU-1菌种,30℃培养24~)将NU-1、NU-2菌悬液与45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基做混合平板,,观察两种菌的生长情况,,玻璃珠震荡打碎,80℃灭活20min,接于种子培养基上,30℃-1、NU-2的种子培养液以4%接种量,按不同比例组成5种配方:A配方为NU-1菌株纯培养;B配方为NU-2菌株纯培养;C、D、E配方均为混合培养,其接种比分别为1:1;1:3;3:,30℃摇床培养,每隔4h观察计数并测pH值,直至50%芽孢脱落,[6]羄蚃膂蚇肇艿羀用OlympusBH-2相差显微镜和血球计数板计数并同时观察芽孢,,求出每种配方各个重复菌数变化的平均值, 晶体蛋白浓度的测定