多管发酵法测定水中大肠菌群实验报告.docx

多管发酵法测定水中大肠菌群
摘要:初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内,37度下培养,24内小管中有气体形成,并且培养基浑浊,颜色改变,说明水中存在大肠杆菌,为阳性如果,如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况,应该延长培养至48小时,若仍不的为阴性反应。平板分离实验中把初实验产期产酸的试管的菌接到伊红美兰琼脂平板上然后培养24小时。复发酵实验中将以上大肠杆菌阳性菌落,经涂色染色为革兰阴性无芽孢杆菌,通过次试验进一步证实
原理:初发酵实验:发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基,并倒置一个杜氏小管。乳糖能其选着作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠杆菌能发酵乳糖而产气产酸。为便于观察细菌的产酸情况,培养基内加有溴甲酚紫作为指示剂,细菌产酸后培养基由原来的紫色变为黄色。
初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内,37度下培养,24内小管中有气体形成,并且培养基浑浊,颜色改变,说明水中存在大肠杆菌,为阳性如果,如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况,应该延长培养至48小时,若仍不产气的为阴性结果。
平板分离:伊红美兰琼脂培养基有伊红和美兰两种染料,在此作为指示剂,大肠杆菌发酵乳糖造成酸性环境时,该两种染料及结合,使培养基产生有金属光泽的深紫色菌落。
复发酵实验:以上大肠杆菌阴性菌落,经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢的,通过此试验进一步证实。原理与初发酵实验相同,经24小时培养产酸产气的,最后确定为大肠杆菌阴性结果。
材料与用具:
培养基
乳糖蛋白胨发酵管(内有倒置杜氏小管) 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管(内有杜氏小管) 伊红美兰琼脂平板

3. 用具
载玻片灭菌带玻璃塞空瓶灭菌试管灭菌吸管
方法:
1水样的采取
从不同水体(自来水、河水)中采集样品
2自来水检查
初发酵实验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中,各加入100ml水样。在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中,各加入10ml水样。混匀后,37度培养24小时,24小时候没产气的继续培养至48小时。
平板分离经24小时培养后,将产气产酸及48小时产酸产气的发酵管,分别划线接种于伊红美兰琼脂平板上,再与37度下培养18到24小时,将符合一下特征的菌落
的一小部分,进行涂片,革兰染色,镜检。
1 深紫黑色、有金属光泽
2 紫黑色、不带或带金属光泽
3 但紫黑色、中心颜色较深
复发酵实验进涂片、染色、镜检,如果为革兰阴性无芽孢杆菌,则挑去该菌落的另一部分,从新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中,每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1到3个,37度培养24小时,结果若产气又产酸,即证明有大肠杆菌存在。
证实有大肠杆菌存在后,再根据初发酵实验的阳性管数查表1及可得大肠杆菌群数。
3河水的检查
将水稀释成1:10与1:100.
分别吸取1ml 1:10、1:100的稀释水样和1ml原水样,各入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另外取10ml和100ml原水样,分别注入装有5ml和50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管中。
以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵实验。
将100ml、10ml、1ml、
结果:自来水检查实验的结果为10ml水量