药品生产企业检验-细菌学基础知识.doc

第六篇微生物限度检查基础知识细菌的大小与形态细菌是一类具有细胞壁与核质的单细胞微生物(分类上属原核生物界)。其个体微小,以微米(μm)为测量单位,以显微镜放大数百倍至上千倍才能看到。细菌的基本形态可分为球菌、杆菌及螺型菌三种(如下图)第一章细菌学基础知识球菌球菌呈球形或近似球形(豆形、肾形、芽头形等),根据球菌分裂后排列方式又分为:双球菌、链球菌、葡萄球菌,除此外尚有四联球菌,八叠球菌等。杆菌杆菌呈直杆状,球杆状或梭杆状等,根据种类形态大小差异又分类:球杆菌长杆菌粗大杆菌棒状杆菌分枝杆菌芽孢杆菌螺形菌螺形菌菌体弯曲,形似螺旋状。螺旋菌是杆菌的一种特殊形式,有时也将螺旋菌归为杆菌,它是当杆菌弯曲形成的。可分为两种:(1)弧菌(2):细菌在繁殖时必须按其种类嗜性满足营养要求,一般是人工配制适合细菌生长繁殖的培养基。(PH)值:—。个别的则在弱酸性或弱碱性条件下最适宜。:最适宜生长温度为37℃,与人体的温度一致,药典规定培养温度为30—35℃。:按细菌对象和二氧化碳的需求可分为需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、微需氧菌。细菌的生长繁殖规律细菌的繁殖速度很快,一般繁殖一代只需20到30分钟,由于细菌不是单个存在,而是大量堆积的,其生长分为四个时期:迟缓期:为最初培养的1—4小时,细菌此时菌体增大,代谢活跃,但分裂迟缓。对数增植期:此时活菌数呈对数直线上升,可持续数小时至数天不等,一般细菌为8—10小时。此期细菌大小、形态、染色体、生物活性等较典型,研究细菌的生物学性状最好选用此期。稳定期:由于营养耗尽,PH值下降,使细菌繁殖速度趋渐下降,繁殖数和死亡数接近,使活菌保持相对稳定。衰退期:细菌繁殖速度从减慢至停止,死菌数增多,菌体变形、肿胀、自溶,不易辨认。细菌的培养生长特性按培养基物理性状分为液体,半固体和固体,细菌在其上生长的情况各异。在液体培养基中生长情况:不同细菌的生长情况不同,可出现:a均匀混浊生长,多数属兼性臭氧菌;b沉淀生长,属臭氧菌或少数呈链状的细菌沉积于管底c菌膜生长,需氧菌可浮在表面,形成菌膜,观察时勿摇动,以防菌膜下沉管底误认为沉淀生长。在半固体培养基中生长情况:用接种针将细菌穿刺接种于半固体中,如细菌无动力(无鞭毛)则沿穿刺生长,而周围培养基清澈透明;如细菌有鞭毛能运动,可由穿刺浅向四周扩散主放射状或云雾生长,可用此法来检测细菌的动力。在固体培养基上生长情况:细菌在平板上经培养后可见光面生长有散在的细菌集团,称为菌落,是由一个细菌繁殖的后化堆积而成。常为白色,灰白色或灰色,亦有淡褐色,淡黄色,菌落边缘整齐或不整齐,有放射状、树枝状、锯齿状、卷发状、表面有光滑,粗糙、邹折,实起或扁平。细菌数测定方法测定供试药品每克或每毫升中污染细菌的数量,是检测药品受到微生物污染程度的重要标志。细菌数测定的方法:★平板计数(平皿法) 目前采用最广泛的测定方法,应取适宜的连续2~3个稀释级的供试液,此方法操作较明了易学****但要掌握其中的操作技巧,才能将减小误差,达到数据准确无误。☆操作技术注意事项A供试品检验全过程须符合无菌技术要求,使用灭菌用具时,不能接触可能污染的任何器物,吸管不能用口吹吸B用酒精灯时,切勿在火焰正上方。以免将供试品内细菌杀死。C净化工作台操作应避免双手来回出入工作台,无菌室内避免操作者来回出入无菌室。D溶于水的供试品须助溶后进行试验,避免实验误差,稀释供试品时须每一稀释度换一支吸管。F取供试液注入平皿,要取均匀供试液,注皿时培养基应水浴保温45±1℃倾注培养基于平皿中与样品须摇匀。从供试品稀释,注平皿倾注培养基,全部操作应1h内完成,时间过长导致细菌繁殖或死亡。☆异常情况处理最常见的是落菌过多,蔓延,以至掩盖另些菌落,干扰计数。防止以上情况可(1)加TTC,每100ml营养琼脂内加灭菌1%TTC溶液1ml。(2)开盖干燥,将已凝固的琼脂平板开该于净化太上,开机1~2h后再培养。(3)换陶瓦盖,将平板盖换上干热灭菌的陶瓦盖。★培养基稀释法适用于含抑菌成分的供试品,是将供试液3份,每份各1ml,分别注入5个平皿中(),每个平皿倾注营养琼脂,混匀、凝固后,培养即可。5个平板点计的菌落之和,即为1ml菌落数,共得3组数据,以3份供试液菌落数的平均值乘以稀释倍数报告。★薄膜过滤法2005版药典新收载的方法,其原理是通过滤膜,将细菌留集在滤膜上,然后将滤膜放置在营养的基质上(如营养肉汤琼脂平板),经培养,微生物从滤膜空隙中吸收营养,在滤膜上增生,形成菌落。,直径一般为50μm,使用前均须灭菌。虑膜消毒前应于清水中浸泡4h以上,装