水稻α—NAC基因家族的克隆及生物信息学分析研究.doc

水稻α—NAC基因家族地克隆及生物信息学分析-生物论文水稻α—NAC基因家族地克隆及生物信息学分析 摘要:新生多肽结合复合体(Nascentpolypeptide-plex,NAC),分别位于1、,通过RT-PCR方法克隆了粳稻品种中花11号中α-,水稻α-NAC基因家族地氨基酸序列比较保守,包含NAC和UBA两个结构域,、%、%,%.本研究结果为Osα-NAC蛋白纯化及蛋白结构生物学研究提供参考,为今后Osα-NAC基因家族地生物学功能研究奠定基础. 关键词:水稻;新生多肽结合复合体α链;生物信息学分析中图分类号:S511+Q78文献标识号:A文章编号:1001-4942(2016)04-0008-06 新生多肽结合复合体(Nascentpolypeptide-plex,NAC)由α链和β链组成,,NAC有一段非常保守地结构域,称为NAC结构域,,是核糖体输出通道地动力组成部分,给新生多肽地形成提供保护,-NAC虽然本身不是一个转录因子,,α-,α-NAC被认为是具有调控转录和翻译双重功能地蛋白. 近年来,植物中对β-(Capsicumannuum)中克隆到和β-NAC同源性很高地CaBTF3,,受烟草花叶病毒侵染地CaBTF3沉默辣椒植株中,HR导致地坏死细胞数量减少,同时HR相关基因地表达量下降,(Spartinaalterniflo-ra)地β-NAC后,在正常生长环境下,转基因植株地生长发育状况不受影响,但是在盐害和干旱胁迫条件下,,BTF3(β-NAC),BTF3(β-NAC)对种子萌发和植株生长发育具有重要地功能,OsBTF3沉默地转基因植株地生长受到明显抑制,,对其表达模式进行分析,并获得了OsBTF3过表达和RNAi转基因水稻,对OsBTF3在抗病性、-NAC和β-NAC以异源二聚体地形式存在于植物细胞中,推测α--NAC在植物物种中广泛存在,但其生物学功能地研究尚未见报道. 本研究根据网站,利用Prim-,采用RT-PCR方法从粳稻品种中花11号中分别克隆得到α-NAC家族三个基因地全长cDNA,并通过生物信息学软件对α-NAC基因家族地同源基因进行分析,为进一步研究其生物学功能奠定了基础. 1材料与方法 ;TRIZOL为Invitrogen公司产品;ReverTraAceα为Toyobo公司产品;EXTaqDNA聚合酶、dNTP、DNAMarker及pMD19-T载体为TaKaRa公司产品;DNA凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒为上海生工生物工程股份有限公司产品;引物合成和基因测序由上海英骏生物技术有限公司完成. -NAC基因家族地克隆 ,每50~100mg材料加入1mLTRIZOL(Invitro-gen),振荡混匀,依照说明书进行总RNA提取,电泳检测RNA质量,紫外分光光度计测定260、280nm下地吸光值,,Oligo(dT)为引物,按照ReverTraAce仅(Toyobo):5×RTBuffer4μL,dNTP混合物(各10mmol/L)2μL,RNase抑制剂(10U/μL)1μL,Oligo(dT)