超敏反应实验.doc

实验目的:
掌握速发型超敏反应发病机制,了解模型构建及检测的方法。
基本原理:
先给豚鼠注射小量异种蛋白,经过一定的潜伏期,动物处于致敏状态。当第二次用较大剂量相同抗原注射琢鼠时,抗原激发豚鼠体内的肥大细胞或嗜碱粒细胞,致使这些细胞脱颗粒,释放多种生物活性介质,豚鼠迅速产生严重的过敏反应及至过敏性休克或死亡。
仪器设备:
显微镜,离心机
实验步骤:
,混匀溶解后保存备用。临用时再用无水乙醇稀释一倍,滴于清洁盖玻片上,在火焰上微加热。乙醇挥发后,染料既固定于盖玻片上。
,经腹腔或皮下注射1:。
~21d,上述豚鼠经心脏注入小牛血清1~2ml。
。

给豚鼠腹腔注射含PBS液15~20ml(),用吸管吸出腹腔液,离心2 000r/min,10min,弃上清液,沉在管底部的细胞用PBS液洗涤一次,弃上清, PBS液备用。取细胞悬液一滴于载玻片上,并盖上涂有中性红的盖片,在高倍镜下观察100个细胞(半小时内看完)。
注意事项:
,要固定好动物,以免划破心脏。
,有回血后再注入过敏原。
,抓伤后及时清理伤口。
4. 制备和保存细胞悬液应尽量在冰浴中,以防细胞死亡。
思考题:
,会出现什么样的反应现象?
实验材料:
1. 实验动物体重200g的健康豚鼠。
2. 实验试剂正常小牛血清;PBS或生理盐水;中性红染液。
3. 实验器材无菌注射器;针头;解剖用具;酒精棉球;玻片;吸管;离心管;离心机;冰块;显微镜;酒精灯
实验结果:
,用前爪搔鼻、咳嗽、打喷嚏、耸毛、痉挛、大小便失禁、呼吸困难、站立不稳,最后窒息而死于过敏性休克。(轻型者可逐渐恢复而不死亡,此时动物处于脱敏状态,在一定时间内注射同种过敏原,则不出现过敏症状)。
,可见肺气肿,豚鼠肠蠕动正常,颜色正常。
3. 30%肥大细胞颗粒脱出。