生化检测技术(10-12.docx

膀2014-02-10—2014-02-12学****总结:***一、常用的生化检测方法莃终点法蚃通过检测终点吸光度变化的大小来求出被测物的含量。膁选择终点法的重要因素,终点时间的确定芅根据时间—吸光度曲线来确定:选取吸光度趋于稳定后的时间肆根据被测物反应终点,结合干扰物的反应情况来确定莃如:溴甲酚绿法测血清白蛋白羈溴甲酚绿(BCG)是一种pH指示剂,(黄色)-(蓝绿色)蚈溴甲酚绿不但与清蛋白呈色,而且与血清中多种蛋白质成分呈色,其中以a1-球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著,其反应速度较清蛋白稍慢。由于在30s内呈色对清蛋白特异,所以溴甲酚绿与血清混合后,在30s内读数可明显减少非特异性呈色反应。蒆一点终点法膄反应达到终点,即在时间—吸光度曲线上,当吸光度不再改变时,选择一个终点吸光度值。待测物浓度=(待测吸光度AU-空白AB)*K(校准系数)肀两点终点法螆在被测物反应尚未开始时,选择第一个吸光度,在反应达到终点或平衡时,选择第二个吸光度,用两次吸光度之差计算结果。袅优点:有效地消除溶血、黄疸和脂浊本身光吸收造成的干扰,适应于反应初期吸光度无明显变化的被测物。蚀固定时间法肁在时间—吸光度曲线上选择两个测光点,既非反应物初始也非终点,差值用于计算结果腿例:苦味酸法测定肌酐,反应初30s,血清中快反应干扰物(微生物、***酸、乙酰乙酸等)与碱性苦味酸反应;第二个30s主要与肌酐反应,并且吸光度线性良好;80-120s之后,苦味酸可以与蛋白质以及其他慢反应干扰物反应。所以用第二个30s为测定时间,有利于提高试验特异性和准确性。莄连续监测法莀也称速率法,测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选择时间—吸光度曲线中线性期的吸光度值,并以此线性期的单位吸光度变化值袈△A/min计算结果芇螄二、了解免疫学检验常用的技术膁免疫比浊技术羀原理:免疫浊度法是可溶性抗原、抗体在液相中特异结合,产生一定大小的复合物,形成光的折射或吸收,测定这种折射或吸收后的透射光或散射光作为计算单位。莅膃袁羁蚈薂薁透射蝿散射袆粒子强化免疫浊度测定法芆备注莂测定原理袀测定入射光因反射、吸收或散射后的衰减,读数以吸收光单位(A)或OD表示膈根据雷利公式,当复合物较小时,呈全透射,透射与散射相当。当复合物大于入射光波的1/20时,形成不对称前向散射,散射的量代表复合物的量。螅选择一种大小适中,均匀一致的胶乳颗粒吸附或交联抗体后,当遇到相应抗原时,则大声聚集,单个胶乳颗粒在入射光波长之内,光线可透过。当两个胶乳颗粒凝聚时,则使透射光减少,这种减少的程度与胶乳凝集成正比,当然也与抗原量成正比。肂蚇优点芇简单实用膅检测快速,精密度高,灵敏度高袂蝿蒅缺点薄准确性低,周期长薃需要特定仪器螀螈肃影响因素莃抗原抗体组分:透射比浊法保证抗体组分在3%一下,%以下薇抗体纯度和效价袆增聚剂(聚乙二醇,一般3%—4%)蒃肄虿生物素与链霉亲和素的应用技术芈金标记免疫技术膆免疫胶体金技术是指以胶体金为标记物,应用于免疫组织化学及免疫分析中,对细胞或某些标本中的多糖、糖蛋白、蛋白质、多肽、激素和核酸等生物大分子进行定位及定性检测的一种免疫学技术。用于疾病检测和诊断的的快速检测试剂主要分两大类,一类是渗滤法或称为滴金免疫渗滤实验,它可以理解为一种以免疫胶体金代替酶标抗体的斑点ELISA。另一类是免疫层