项目五 对流免疫电泳试验.doc

(Counterimmunoelectrophoresistest) 【实验原理】在适宜缓冲液和电场条件下,由于琼脂凝胶中的抗原和相应抗体在电泳和电渗作用下能相对移动,所以二者会在加样的两孔之间相遇,并在它们浓度比例合适之处形成白色沉淀线。据此临床常用该方法检测抗原,以诊断某些疾病。【试剂和器材】 、待检血清、抗AFP诊断血清。。巴比妥钠 先将巴比妥置于三角烧瓶中,加入200ml蒸馏水,加热溶解后再加入巴比妥钠,最后加蒸馏水至1000ml。 ,,使琼脂浓度为12g/L,沸水浴中溶解至澄清。 、电泳槽、万用电表。 、绘图笔尖、吸管、滴管等。【步骤和方法】~4ml,浇于载玻片上,冷却后打孔。-6打孔,孔径约3mm,孔距4~5mm,挑去孔中凝胶。-6分别加入抗血清、AFP阳性血清、待检血清,以加满孔为宜,注意不要溢出。,抗原孔侧置阴极端,抗体孔侧置阳极端,两端分别以2~3层滤纸或纱布搭桥,使凝胶和槽中缓冲液相接。按通电源,将电压控制在4~6V/cm长,或电流3~4mA/cm宽,电泳30~60min。【结果判定】电泳完毕后关闭电源,待15~30min后取出琼脂凝胶板观察结果,或照相、染色后保存。阳性对照孔与抗血清孔之间必须出现沉淀线,否则试验须重做。待检血清孔与抗血清孔之间出现白色沉淀线为阳性,不出现者为阴性。1阳性对照孔2~4待检血清孔图1-6对流免疫电泳【注意事项】、陈旧血标本或由于α2-巨球蛋白可引起假阳性,它靠近阳极呈弧状。为排除这种假阳性可用参比电泳鉴别,,,加样后电泳,两沉淀线吻合为阳性,相交为阴性,其它试验条件与以上试验相同。、离子强度、电压和电泳时间对检测结果均有影响,应注意控制。。当两孔距离为1cm时,~2h;,电泳时间为1h。,可通过稀释抗原适当调整,以免出现假阴性。【方法评价】 、快速,敏感度比双相免疫扩散法高8~16倍。 、高亲合力的诊断抗体,否则结果难以解释。。【临床意义】对流免疫电泳在临床常用于定性检测某些抗原,以对某些疾病或传染病作快速诊断。也可用于抗原的半定量测定,或根据沉淀线位置、形状作抗原和抗体相对浓度的分析。由于该方法分辨率差,当有多种抗原抗体反应系统存在时,形成的沉淀线常重叠,而难以分辨,所以不用该方法作某种抗原或抗体组分的免疫化学分析。【思考题】?为何选用高电渗作用琼脂作为凝胶介质?? 项目六火箭免疫电泳试验(Rocketimmunoelectrophoresistest) 【实验原理】抗原在含一定浓度抗体的琼脂板一端,在电场作用下,向另一端泳动时抗原抗体复合物形成的沉淀呈圆