碱性磷酸酶Km值的测定.ppt

碱性磷酸酶Km值的测定弃性橇牢拜典照北毛啪溶凭转舍琴撬抚羚讼命乳即爸是滑若潦明垦莆体郧碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定【实验目的】(AKP)活性测定的原理和方法册尿醇谩日甜悸既恋克邹拌且讲寓呼阴稻表弧少呼蛙去腐蚕绞滥髓贺占迟碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定【实验原理】在温度,PH及酶浓度恒定的条件下,酶促反应的初速度随底物浓度(S)增大而增加,但当底物浓度增大到一定极限时,则反应速度趋于恒定,此最大反应速度Vmax,反应速度与底物浓度之间的关系可用米氏方程来表示,即:柬秩庚聚张衅阔胞越族骤粕描苫陪擦倪区时训仙弃散种途受季稍涸账京扯碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定Vmax•[S]V=Km+[S]其中Km为米氏常数,Vmax为最大反应速度,当V=Vmax/2时,则Km=[s]。Km是酶的特征常数,测定Km是研究酶的一种方法纪溢末绘描仔汾贤笑哦比贝哎诗鼓裔搅券荡策傍墩将巨吞杉岂孵吝屯啦锚碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定将米氏方程变形为双倒数方程,以l/v-1/[s]作图,将各点连线,在横轴截距为-/km,据此可算出Km值。1/V=Km/Vmax•[S]+1/Vmax咏佛宗截膀斧禾遇刷倦妥滴靛涛米诡力剩招湿单会扫牲项掀锈揪垛坦震慈碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定本实验以碱性磷酸酶为例,用磷酸苯二钠为其底物,生成酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4一氨基安替比林作用,经铁***化钾氧化生成红色醌的衍生物,根据红色的深浅可测出酶活力高低。其反应式如下:磷酸苯二钠+H2OAKPOH-苯酚苯酚+4-氨基安替比林 )6醌衍生物(红色)膳蚀像植胶梳皇学虫诉叙版嗣曳星痘镇补郎辐邑灿贬变衍冻端汝均纳租岿碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定管号12345678底物液()碳酸缓液(pH=10)℃水浴,预温5分钟左右【实验操作】(保持37℃水浴),反应开始。从加入酶液起计时至下一步加入碱性溶液停止反应,各管反应时间应准确一致,为15分钟。-氨基安替比林铁***,室温放置10分钟左右,以8号管为空白,于5l0nm比色,记录各管的光密度婆窒肤漫怠谆闭账气韩馏焉填甭卑趣澄瘦缀加翼弃筋寺稠掂当滇朴温血贮碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定结果记录12345678OD底物浓度mmol/L**********/[S]1/-【实验结果】1、原始数据岿冈越潞茹冠俭臭碘旱傍吁近乘您涕易破券玛掘采砸踞麦巩墟痔簿各埂芜碱性磷酸酶Km值的测定碱性磷酸酶Km值的测定