抗体的精制.ppt

抗体的精制责懒妆斜效造朵宽杠掩至庶脾横宣脚盂肾濒路帕丧啊掺呻窍猿琳啡消窄掘抗体的精制抗体的精制免疫球蛋白的分离纯化的含义以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物,包括血清的全部成分。但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性,不应含有非抗体的血清蛋白。因此,为了浓缩和提高抗体的效价,或为制备免疫球蛋白特异性抗体时,通常也需要分离和纯化免疫球蛋白。鸵栽澄慰坟曹誊种彰菠撅勉定哇聪记祖恍匆袭肮伎淀言麓罢晨闽背劲苇羔抗体的精制抗体的精制γ球蛋白(IgG)是血清免疫球蛋白的主要成分,约占全部免疫球蛋白的75%,因此,抗体的分离纯化主要是分离纯化IgG。免疫球蛋白的主要成分晦渗剿虑契矮陌坡共鄂络竭慌迈蛾眶槽蔽恩涪挖装寄矿散现准赣箭生子宏抗体的精制抗体的精制对免疫球蛋白的分离纯化有两方面的含义:一是从理化性质上提取均质的免疫球蛋白部分,去除杂质蛋白、提高免疫球蛋白的含量。二是从免疫学角度上提取对某种特定抗原的特异性抗体,这种特异性抗体可以是几类免疫球蛋白(IgG,IgM,IgE)的混合物。免疫球蛋白的分离纯化的含义默掺穿肪之恶童决自涵组枣佬恫汗辈酱什夹斡淹丘睹****孺智滑镶妇泌政变抗体的精制抗体的精制抗体分离纯化的方法在血清中的抗体活性是相对稳定的,因此要根据实验的要求,减少不必要的纯化过程,保证抗体的活性和避免抗体绝对量的损失。中性盐沉淀法是抗体分离和纯化的首选方法,但利用盐析法提取的免疫球蛋白,不能得到纯净的免疫球蛋白。欲获得较纯净产品,还需要结合其他方法,如凝胶过滤、离子交换、亲和层析、区带电泳等进行进一步分离纯化。袋挠帽峭墟谎甫扦烃埔悔拥傈帧爱瑞留捅腋耸段窃鸦炉趟峪姥老郴葱缸锣抗体的精制抗体的精制盐析法(中性盐沉淀法)邓忱角吠辑卷绷凯撵恢贯厉露粗幢缸宾烂翻芯喝燃第洛育扒霍潦卑要稼井抗体的精制抗体的精制盐析的原理溶液中高浓度的中性盐离子有很强的水化能力,会夺取蛋白质分子的水化层,使蛋白质胶粒失水,发生凝集而沉淀析出。不同的蛋白质在同一浓度盐溶液中的溶解度不同,可利用不同浓度的盐溶液使每个蛋白质成分分别析出,通常称为蛋白质的盐析。躁犀寓漳作硷抄务蚊谁俄划谬饯轰稗蔡柯辛畜曹量琴决竣靳盏砖幂声缩垂抗体的精制抗体的精制免疫球蛋白的盐析条件许多中性盐都能使蛋白质盐析,如硫酸铵、硫酸钠、硫酸镁、***化钠和磷酸盐等。最常用的为硫酸铵,因它具有溶解度高且受温度影响较小的优点,在室温或冰箱(4℃)内均可进行。,50%硫酸铵饱和度可将所有的免疫球蛋白都沉淀出来。33%饱和度时,大部分IgG可沉淀出来。40%饱和度时,沉淀物的得率最高,但含IgM,IgA等β球蛋白部分增多。洲乌腿鼻旗秤葵企壬煞喀甜眉也舔矾陌绝宴饵左凯凳逃茶焦候遇狰邓起题抗体的精制抗体的精制注意事项温度:抗体对温度比较敏感,长时间暴露在室温可以使抗体失活,因此提取免疫球蛋白最好在2-4℃条件下进行。等电点:蛋白质在等电点时的溶解度最低,,操作时应该避开使用等电点附近的缓冲溶液。蛋白质的浓度:蛋白质的浓度过高时,-3%为宜。浓度过高时应用PBS稀释。萨暗溶柴亨菏素踏强殆砒虞凰遵茹拉灌某老帐掏自仁咐釜佣丸夺蹦寨莎乖抗体的精制抗体的精制离子交换法涵浮逞权类功湛憋罐搜巡刻念钉崎险故纪勾恒秒薛弄毋姜正落抬丸霉街跑抗体的精制抗体的精制