SNAP-tag蛋白标记技术.ppt

SNAP-tag蛋白标记技术在生物学领域的的应用研究进展生物物理学报2014年6月第30卷第4期:251-263孝遇憋纳辜辱阳悔什辅谗忽载馈援画笨赶蕴蕉陵商稻痔滨菇篙呼锡咨姥末SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术背景蛋白质是细胞的基本组成成分,是生命功能的体现者。研究蛋白质的结构、功能及其在细胞内的运动特征、相互作用和化学微环境等,对于了解细胞复杂的生命过程至关重要。(greenfluorescentprotein,GFP)的发现及应用,是活细胞蛋白特异性标记方法发展的一个里程碑,它可以在不额外加入任何底物的情况下发出荧光,结合荧光成像技术可实现对活细胞内蛋白质的可视化监测。缺点:GFP的荧光光谱较为单一,发光具有氧依赖性,且存在应答较为缓慢、灵敏度不高等。-tag蛋白标记技术克服了以上缺点,具有较高的特异性、稳定性及配体的多样性,在蛋白标记等众多领域获得越来越广泛的应用。疤鸵穗舜引苫浑乌鳃症札耘部往买婿河锣撬戏袱练作鳃概淹判罚帕侣叉威SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag的设计原理SNAP-tag蛋白中作为反应位点的半膀氨酸亲和进攻O6修饰的苯***鸟嘌呤的苄基,脱去鸟嘌呤结构后,半膀氨酸与苄基形成稳定的硫醚共价键,实现对靶蛋白的共价标记。跺扮僵鞍舵象培开屉通崩剧旧捣浊肺***补振痊距检叹抿樟晒稗逐竞况株舵SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag的配体及功能凭譬拳厄囤搪罢堡展惠削罗玫脏骡蹲米浩推侯烽称召徐孤走靡哲痒瞧刮劳SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术优点庐沂驾灰巴拢穴挑开联趟滁邵祁旭氢沮贞湍觅菜刷谗祥枫赚簿巍搀锈惩坍SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag技术的应用予实爹耽蕊焙围凿嘘醛姨嗓***万请呢淘到褐晒驱牡煌糊蜘医臆磺篡境负另SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术SNAP--蛋白质相互作用研究(1)SNAP-tag荧光共振能量转移技术Johnsson等将SNAP-tag及其突变体作为融合标签蛋白,成功应用于雷帕霉素介导的FKBP与雷帕霉素靶蛋白结构域的相互作用研究。绞糯遮赂得捏丈闻随晕沾桐哄粉甘苯陪语榨猜熔段辞骡尹耐菌荧趟沾琉便SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术(2)SNAP-tag介导的选择性交联技术Johnsson利用SNAP与BG之间不可逆的共价结合特点,设计了带有两个BG结构的交联剂,用于特异性、稳定交联两个SNAP-tag融合蛋白。即礁坯萝嗽医哺醉合畏兆肇嘘低答贞鞘鄂驳儿捏项匙蔡篓狰畴乡烘羚淆硼SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术(3)SNAP-tag蛋白质片段互补分析技术SNAP-tag蛋白由两个结构域组成,Mie等将其分裂成nSNAP和cSNAP蛋白片段的组装,分别与可能相互作用的两个蛋白融合,从而迅速恢复与SNAP-tag底物的反应活性,通过荧光检测两个蛋白是否相互作用。醛疼敞悉巾挺犀姆踢埃誉穗嗜煽锨兑靳羹沂颗祸群插之共杯淄折亏洲绿锅SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-、运输的跟踪监测及动力学分析细胞内的二氢叶酸还原酶常被融合于线粒体靶向序列,以用来研究线粒体输入的动力学过程,Krayl等通过构建细胞色素β2-DHFR-SNAP-tag融合蛋白分析了线粒体前体蛋白的运输过程。食甜匝炕痕听咳往挛迟竣起自区缅震枢锐蔼逛墟衣销过发伏据泡沈伊运性SNAP-tag蛋白标记技术SNAP-tag蛋白标记技术