3 DNA replication and repair1.ppt

3DNA的复制与修复(10-12h)(即DNA复制一般特征),即碱基互补—两条链互补,碱基配对—模板式复制。。⑴细胞小,生活周期短,易在人工条件下培养,原核生物易获得各种突变体。原核生物中的大肠杆菌是在各方面研究最深入的一种。⑵噬菌体(phage)是研究复制机制的一个重要实验系统。优点:基因组小,易操作;DNA分子有线形、环形、单链和双链形式,可代表不同类型DNA的复制。如:线型,θ式,D型等复制。已研究过的典型噬菌体系统:Phageφx174,(DNA复制一般特征)DNA合成的化学基础DNA复制是半保留复制DNA复制的起点DNA复制的方向DNA复制是半不连续的(冈畸片断、先导链、后滞链)DNA合成的化学基础DNA合成需要关键性的底物存在:首先,DNA合成需要四种脱氧核苷三磷酸-,anddTTP其次DNA合成有模板-引物接头(primer-templatejunction)引物是与模板互补,比模板短的一小段序列,引物的3‘端有-OH基;,从5’3’延伸DNA双螺旋的2条链是反相平行的。即新生DNA链与模板链方向(3’5’)相反。历史上曾经提出过DNA复制的3种假设DNA复制是以半保留复制方式进行(semiconservativereplication)In1958,MeselsonandStahlprovidedtheexperimentalproofforthesemiconservativemodelofDNAreplication(著名实验:用同位素标记,密度梯度离心。)大肠杆菌在含有15NH4Cl为唯一氮源的培养基上生长多代,这时DNA中的嘌呤和嘧啶中的氮几乎全是15N。然后将大肠杆菌转移到含有14NH4Cl的培养基中,在不同的间隔时间,收集细菌并裂解,提取DNA,并用CsCl梯度密度超速离心进行分析()。