EV71的抗病毒治疗情况.doc

Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;mercialuseEV71的抗病毒治疗研究概况    目前从Medline上能检索到的关于EV71抗病毒治疗研究的文献不足20篇,大多数为体外研究或动物实验,现根据其中部分文献简要介绍EV71抗病毒治疗研究的概况。    乳铁蛋白(lactoferrin)我国台湾的研究人员Weng等报告(AntiviralRes,2005,67:31),牛乳铁蛋白对人的两种细胞系有保护其不发生EV71感染的作用。该研究发现,乳铁蛋白分子可与EV71的结构蛋白VP1相结合,而这种结合可被抗VP1抗体所阻断。此外,研究者还发现乳铁蛋白可诱导一种细胞系产生α干扰素,并抑制EV71诱导的白介素6(IL-6)产生,可保护小鼠,使其能经受致死性EV71的攻击。    RNA干扰技术新加坡的Sim等报告(Virology,2005,341:72),用一种针对EV71基因组不同序列区的小干扰RNA(siRNA)可显著减轻体外培养的人细胞系感染EV71后细胞病变,未见显著不良作用。新加坡的Tan等报告(AntiviralRes,2007,74:A1),一种化学合成的短发卡样RNA可显著抑制培养细胞内EV71的复制,这种抑制是剂量相关的。抑制作用在感染后持续72小时。    新的化学合成药物我国台湾省研究人员Chern等发现(MedChemLett,2004,14:2519和2004,14:5051),吡唑啉[3,4-d]嘧啶类物质(pyrazolo[3,4-d]pyrimi-dines)在很低(毫微克分子级)浓度下对肠道病毒,特别是柯萨奇病毒有特异性抑制作用,对EV71有中等抑制作用,而未显示对细胞的显著细胞毒性作用。    干扰素诱导剂polyI:C我国台湾研究者Liu等(JGenVirol,2005,86:3263)用小鼠模型进行的研究表明,polyI:C提高了感染EV71小鼠的生存率,降低了小鼠组织内病毒滴度,血清中α干扰素水平的同时升高。而用针对I型干扰素的中和抗体处理小鼠,则引起了小鼠的死亡率增加及小鼠体内病毒滴度的升高。研究者认为,I型干扰素可能对EV71感染的控制起重要作用。周志浩6日表示,目前台湾流行的EV71型B5亚型与中国的C4亚型,亚型不同,台湾在很久以前出现过C4亚型,病毒要从一种亚型演化为另一种亚型,需要一段时间,所以两地关连不大。前一阵刚刚做了流感病毒纯化,效果很好,应该可以用于兔瘟病兔毒。1、用超速离心或超滤方法浓缩病毒10倍以上。2、制备25%-70%连续梯度蔗糖约38ml,制备时每个超速离心管(用广口管)加入约32ml蔗糖,小心保持梯度层,不要剧烈震动。这一步非常关键,如果蔗糖密度梯度制备得好,离心后可以在相应梯度位置看到一层厚厚的蛋白,否则蛋白层很薄或看不到蛋白层。3、每管加入4-5ml浓缩的病毒。配平。4、4度20,000rpm离心18小时。5、用长针头收获病毒蛋白层,尽量收获干净。6、用STE缓冲液(100mmolNaCl,10mmolTrisHCl,1mmolEDTA,pH8)将收获的病毒按1:5稀释,此步骤的目的是使蔗糖浓度降至10%以下,以保护病毒。7、然后取一个新的超速离心管(小口的比较好),将稀释过的病毒移入,加满STE缓冲液,4度55,000rpm离心1小时