牛卵丘卵母细胞体外成熟的研究进展-畜牧渔业论文.doc

牛卵丘卵母细胞体外成熟的研究进展-畜牧渔业论文牛卵丘卵母细胞体外成熟的研究进展 丁丽艳作者简介:丁丽艳(1971-),女,研究员,硕士研究生,主要研究方向是牛的繁殖和遗传育种。(黑龙江省畜牧研究所胚胎工程重点实验室161005)摘要:牛体外受精技术是胚胎生物工程技术研究的基础,其中牛卵丘卵母细胞体外成熟培养是体外受精技术的关键,也是重要环节。自上世纪三十年代以来,国内外研究者们都付出了大量的研究工作,并取得了较大研究进展。目前,牛卵丘卵母细胞体外成熟培养体系已经确立,但其中的卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育阻滞,卵母细胞的成熟调控机理等问题,还有待研究者们进一步深入探讨。本文主要从牛卵丘卵母细胞的获得方法、体外培养条件、体外培养液及添加物、存在问题等几方面来综述其研究进展。关键词 :牛;卵丘卵母细胞;体外培养牛卵丘母细胞体外成熟是在牛体外模拟卵泡环境,进而诱发未成熟卵母细胞成熟的一项生物技术。其是牛体外受精(IVF)的基础,也是重要环节之一,牛卵丘卵母细胞的体外成熟质量直接影响其体外受精效果,甚至是影响出生牛犊的质量。本文就牛卵丘卵母细胞体外成熟研究现状、研究方法、体外成熟的判定和存在问题等进行论述。1研究现状有关专家于1935年利用兔卵泡中分离出来的卵丘卵母细胞进行体外培养,经成功减数分裂后,完成了兔卵丘卵母细胞的体外成熟过程。此后,哺乳动物的卵丘卵母细胞体外成熟培养技术得到了迅猛发展。目前,卵丘卵母细胞的体外成熟技术已被广泛应用于科学研究、医学生殖工程和畜牧生产中。牛未成熟卵母细胞经体外培养,体外成熟率可达90%以上。然而,体外成熟卵母细胞的质量和发育潜能与体内成熟的卵母细胞相比仍有较大差距,体外成熟的卵母细胞存在细胞质成熟差或者细胞核和细胞质成熟并不同步等问题。针对目前牛体外受精研究中出现的问题,有关专家认为,牛卵丘卵母细胞在成熟过程中退化以及细胞质不完全成熟是造成其体外受精胚胎生产效率低的主要原因。。将收集卵巢置于25~35℃的生理盐水中,添加抗生素,3小时内运回实验室。将术者的手和母牛的卵巢消毒后,将卵巢上多余的肉割掉,用装有18号针头的5毫升注射器,从卵巢表面直径为2~6毫米卵泡中抽取卵母细胞,也可用消毒的手术刀片切割卵巢,回收卵母细胞。此方法中卵巢保存温度对卵母细胞的质量影响较大,此方法获得的卵母细胞成本低,但由于淘汰的牛大多无系谱,难以做到良种化。牛活体采卵技术是继牛体外受精、胚胎移植(ET)技术之后研究并推出的又一项胚胎工程技术。牛的活体采卵技术于90年代后期开始研究,2001年,活体采卵、体外受精的牛胚胎移植后成功获得犊牛出生。此项新技术与IVF及ET技术的配套综合利用,将更充分地挖掘优良母牛的遗传潜力,缩短牛的世代间隔,扩大遗传背景清楚、价格低廉的胚胎来源,从而加速养牛业的遗传改良。同时,也可为牛的基因工程研究提供大量的试验材料,以促进动物基因工程研究迅速发展。、内窥镜法和超声波法。盲采法完全依赖操作者的经验进行,采集结果不稳定,回收率低,且对卵巢和阴道组织损伤比较大,延长了采卵间隔,降低了采卵频率,因此限制了该技术的应用。内窥镜法可直观、准确地对卵泡进行穿刺,对卵巢损伤