毛囊重建体内模型构建的实验的分析.pdf

毛囊重建体内模型构建的实验研究硕士研究生:肖顺娥指导教师:胡志奇教授摘要背景:毛囊的形态发生是上皮与真皮细胞间相互作用的结果。上皮中的多能干细何种机制发生作用,有哪些信号、因子参与目前尚不完全清楚。体外构建功能完整的毛囊比较困难,因为它需要比较复杂的三维空间结构。毛囊重建的体外模型已从单层毛囊细胞的培养演变到用毛囊细胞三维构建含有毛囊的人造皮肤。虽然,这对毛囊组织工程研究具有一定价值,但是,体外毛囊模型的构建陷。在体内,毛囊除通过血管供应营养物质和氧气外,也通过旁分泌机制接受来自邻近细胞的信号分子,如生长因子、细胞因子的调节【怠6逋饷业闹建由于营养物质、氧气、信号分子的缺失或者减少并不能完全模型体内毛囊发育过程。因此,建立适宜的体内毛囊发育模型用以研究毛囊形态发生及周期循毛囊细胞移植是治疗秃发的一种实验性细胞疗法,以获取增殖能力强并且具有毛囊诱导能力的毛乳头细胞为前提。但是,毛乳头细胞经体外培养扩增后其诱导能力会逐渐丧失。目前,与毛乳头细胞诱导能力相关的明确的细胞表面标志尚未得到识别,也没有简便的体外实验用以检测毛乳头细胞的毛发诱导能硕士学位论文胞和真皮中的毛乳头细胞是毛囊形态发生中不可或缺的成分,但这两者间通过在回答一些有关毛囊发育信号通道和毛发周期调控复杂的问题上存在一定的缺环分子机制非常重要。力。因此,建立一个简便、可靠,并能够直接检测毛乳头细胞诱导能力的动物模型也很有必要。
目前,有多种毛囊重建体内模型。小室法,最早由和介绍使用,暧侄源四P徒辛烁慕且讶范ǖ目捎糜诿抑亟研究的模型之一。另外一种模型是注射法,最先由介绍使用,后来对此模型进行了改善。注射法是将上皮和真皮细胞的混合物注射至真皮内重建毛囊。三明治法最先由和介绍使用,是将毛乳头细胞插在供体大鼠足垫皮肤的上皮与真皮之间,然后将复合物移植至受体鼠皮肤创区。皮瓣法是近来发展的,是在裸鼠背部置于一块硅胶板,将上皮薄片平铺在硅胶板上,然后将真皮细胞移植至上皮薄片上,最后将裸鼠背部皮瓣覆盖缝合。每种毛囊重建体内模型均有其适用情况,小室法具有较好的重复性,被广泛应用。上皮与真皮细胞被移植到小室后两者能够密切接触,为毛囊的重建提供了适宜的空间和环境,并排除了受体自身细胞的干预。移植后芤浦膊课挥行碌拿发长出,毛发质量、密度与正常毛发相似,这为毛囊重建的评估提供了最直接的证据。实验中,我们构建了小室法毛囊发育模型,并探讨了上皮与真皮细胞何者在毛囊重建中起主导作用。但是,小室法仍存在一些缺陷,如对动物创伤太大;皮肤创面容易感染随后动物死亡;需要大量的细胞笤夹鑜上皮细胞嫫は赴:一只动物只能做一个小室移植。这将一定程度上影响毛囊重建的成功率。另外,一些很难获取的或者经过特殊处理的细胞用小室法移植,实验难度与实验耗费会明显增加。因此,我们尝试使用微型小室进行细胞移植,以期改善上述不足。过显微解剖法和酶消化法分离获取鼠触须毛囊和人头皮毛囊中的毛乳头细胞,其工作难度大,获取率低。在毛囊重建的研究中,迫切需要一种简便的方法来获取大量的具有诱导能力的毛乳头细胞。出生后内的∈蟊巢科し糁毛囊大部分处于形态发生第锥沃埃嫫ぶ泻械拇罅康木哂杏盏寄芰Φ毛乳头细胞。将新生鼠真皮细胞经体外培养扩增这为毛乳头细胞的来源提供了一种理论可行的途径。我们用培养的真皮细胞与新鲜的上皮细胞一起移植,以毛乳头细胞是毛囊重建中不可或缺的真皮成分。目前,国内外学者主要通中文摘要
目的:方法:探讨培养的真皮细胞用于毛囊重建的可行性。菇ㄐ∈曳抑亟P菇ㄎ⑿托∈曳抑亟P教峙嘌男律笳嫫は赴糜诿抑亟ǖ目尚行律笃し粝赴孕∈曳ㄒ浦补菇曳⒂P取新出生内的近交系小鼠背部皮肤,用%中性蛋白酶消化过夜。含デ唷⒘疵顾漂洗后,用显微镊将表皮和真皮分离并分织被消化。加入高糖培养基罩瓜S目筛网过滤以去除组织碎块和细胞团块,将收集的单细胞混悬液于离心管中以痳胄,重复离心危ド锨逡海尤隓咛桥嘌用高糖培养基缓現匦蟊赣谩M保髡嫫は赴氡砥は赴不同的比例,分别为真皮细胞个表皮细胞个⒄嫫は赴个表皮细胞×、真皮细胞×、真皮细胞个表皮细胞×、真皮细胞×砥は赴、表皮细胞用胄墓艿母亲又票赋尚∈摇H“离心管,将盖子剪下并将其中央裸鼠予腹腔注射戊巴比妥钠/樽砗螅园捕庀颈巢科肤椋舻都粝块圆形皮肤,深达肉膜,直径为小室直径的一半。把制各好的小室插入到皮肤与肉膜之间,上端暴露于空气中,将盖子周边松弛皮肤缝硕士学位论文别剪碎,分别用%徒涸嫦笥遥涠洗荡颍钡剿凶别调整细胞浓度为个/。取真皮细胞×砥は赴个直鹩高糖培养基重悬后备用。部分去掉,在盖子下端贴一层扎有多个小孔的纸胶布,高压消毒后备用。受体/
合固定,形成一个可以容纳细胞悬液的开放小室。将细胞混悬液注射至小室内,笤谛∈蚁畈恐醒爰艨滓源偈勾疵娓稍铮周后拆去小室。分别于细胞移植后、周大体观察移植部位毛囊形成、发育及毛干生长情况。芎笠浦膊课蝗〔模ゼ