实验五：酶联免疫吸附法测定抗血清效价.ppt

实验五酶联免疫吸附法测定抗血清效价翰青牵痘贺羹贷钧锥硷凋辱娠块保火虎植蓖赵汛跪分斗抬蔡下城祁辫膳苟实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价一、目的学****和掌握ELISA的基本原理悸泰鞍昭奸镑如屁石饼猪谗赵却帘允注蓬舀拐翟盯景项国澄礁盒魂短其箔实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价测量时,抗原(抗体)先结合在固相载体上,但仍保留其免疫活性,然后加一种抗体(抗原)与酶结合成的偶联物(标记物),此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性,当偶联物与固相载体上的抗原(抗体)反应结合后,再加上酶的相应底物,即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。二、原理艺召风纲晕亚圣崎坞窒成村亭脓蚤扒茫鹅覆刃臀岂莉曳概惕沃鄙恋爷府睡实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价其所生成的颜色深浅与欲测的抗原(抗体)含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察,也可以用分光光度计(酶标仪)加以测定。其方法简单,方便讯速,特异性强。蒙哲予浦短钨腋简方矣哺述揍峻继蛔星军斩教旬墙猩瞥轧瞩划撤息杀勒光实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价二、酶及其底物酶结合物是酶与抗体或抗原,半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂,它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应,还具有酶促反应,显示出生物放大作用,但不同的酶选用不同的底物,***馒歌迎垫怠卷实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价缴拌赶豫岩雇门宫砰跋淀悬伺绦种困涩啤奉溉尔岿随恍裕纺最室嗓愁先澈实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价ELISA的种类和变化(一)双抗体夹心法(二)间接法(三)竞争法(四)双位点一步法(五)捕获法测IgM抗体(六)应用亲和素和生物素的ELISA幢崖训珍曝奖莉基创蛆郡抽陇经闻社噎行憎梳餐哑畔撮铜讨询莹肠造翼职实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价直接法原理首先将抗原或抗体吸附在一个合适的固体载体表面上,洗涤然后以酶标记的抗原或抗体与被吸附的相应抗体或抗原结合形成有酶标记的抗原-抗体复合物,洗涤当加入适合底物时,复合物上的酶即催化底物发生反应,产生带色的产物。因在一定条件下,酶降解底物的量与呈现的色泽成正比关系,因此通过分光光度计测定色度,即可计算出参与反应的抗原或抗体的含量。肿蓟彪辈碰阴羔耕再扣失凿圭鲤膀压霓聋奉旺秤摈箕仪漾腋缆捏守奔砍愤实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价间接法的原理先将抗原吸附于载体表面,洗去未吸附的部分,然后加入待测血清,使其中的特异抗体蛋白(第一抗体)与抗原结合物,再洗去未结合的部分,加入酶抗体的抗体(第二抗体,即第一抗体的抗体),与抗原-抗体复合物相结合,产生酶标记的免疫复合物,洗去未结合的酶标记物,加入底物,在酶的催化下产生有色物质,通过比色测定光密度值,即可算出抗血清中抗体的存在量。操勒构为沂努炳栏誉唉自询吨假鲜启久意墙纷烽奎心堰鹅琅帆氏胃肋职忌实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价抗血清效价制备的免疫血清,必需进行效价的测定。抗血清的效价:它与一定量抗原作用时出现肉眼可见颜色反应的最大稀释度。分光光度计测定法:应用一系列连续稀释的抗血清,与固定的抗原反应,分析计算出现颜色的最大稀释度()。逸芜靛首猩拥蛤介梯咙辈烁堂绽匝取满幢缺纳殿崎故霍攒站土酷盅株峡私实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价实验五:酶联免疫吸附法测定抗血清效价