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基因工程操作过程.ppt

文档分类：中学教育 | 页数：约21页举报非法文档有奖

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第四节基因工程操作过程一、DNA的体外重组(切、接)二、重组DNA分子的转化和扩增(转、增)三、转化子的筛选和鉴定(检)转基因技术一DNA的体外重组(切、接)粘性末端连接和5‘端去磷酸化利用衔接物进行平末端的连接3’5’粘末端平端化的连接同聚物接尾法二DNA分子的转化和扩增(转、增)转化的原理与技术转化率转化细胞的扩增转化的原理与技术■Ca2+诱导的完整细菌细胞的转化Ca2+诱导的完整细胞的转化适用于革兰氏阴性细菌(如大肠杆菌等),1970年建立此技术,其原理是Ca2+与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构,后者经热脉冲发生收缩作用,使细胞膜出现空隙,细菌细胞此时的状态叫做感受态。基因工程菌HB101,JM109转化(transformation)制备感受态细胞冷的***化钙处理,细胞处于最适摄取和容忍外来DNA的生理状态感染(infaction)转导(transduction):由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息转移过程转染(transfection):真核细胞主动摄取或被动导入外源DN***段而获得新的表型的过程。大肠杆菌感受态细胞的质粒转化:取100ml感受态细胞,加入相当于50ng载体的重组DNA连接液,混匀冰浴放置半小时在42℃保温2分钟(热激)快速将转化细胞转移至冰浴中放置1-2分钟加入1ml新鲜培养基,于37℃培养1小时(扩增)涂在合适的固体培养基平板上进行筛选

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