依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠脑组织水通道蛋白9mRNA表达影响.pdf

摘要
依达拉奉对局灶性脑缺血大鼠脑组织水通道蛋白
-9mRNA 表达的影响
研究生朱德坤导师张小宁教授
摘要
目的:⑴本实验旨在通过建立重复性强、稳定的大鼠大脑中动脉永久性缺血动
物模型,并在此基础上进行神经功能、脑梗死体积、脑组织含水量、病理学改变及
水通道蛋白-9(AQP9)mRNA 动态表达变化的观察,进而探讨分析大鼠脑缺血损伤中
AQP9mRNA 动态表达与脑水肿之间的关系以及 AQP9 在脑缺血损伤中的作用。⑵通
过依达拉奉对脑缺血大鼠脑组织中 AQP9mRNA 表达变化的研究,进而探讨依达拉
奉在脑缺血损伤中的保护作用及机制,为急性缺血性脑血管病的临床治疗提供理论
和实验基础。方法:采用成年雄性 Sprague-Dawley 大鼠 252 只,随机分成假手术组、
盐水组、依达拉奉组,每组 84 只,每组再按术后 6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d
七个时间点分成 7 小组,每组 12 只。采用改良线栓法,用尼龙线对大脑中动脉栓塞,
建立永久性脑缺血大鼠动物模型。建模后用 Longa 神经功能评分方法和 Berderson 神
经功能评分方法对每只大鼠进行神经功能缺损评分,1~3 分大鼠进入研究中。试验
中缺失的大鼠要随机补充,保证实验动物数量不变。在依达拉奉组,每只大鼠以依
达拉奉腹腔注射,剂量为每公斤体重 3mg,每 12h 给药一次;生理盐水组给等剂量
的生理盐水;假手术组不给药。在相应的时间点,随机从每小组中选取 6 只模型动
物,处死并快速取出大脑。冠状切去嗅球和额极 4mm 组织,前额 3mm 厚脑组织用
于脑含水量测定,按照干湿重法公式:(湿重―干重)/湿重×100%,测量脑含水量的百
分比。剩下的后半部分用实时荧光定量 PCR 方法检测 AQP9mRNA 的表达水平。余
下的 6 只模型被处死,暴露出心脏,用生理盐水 200ml 左心室灌注。以前囟为中心,
2mm 厚冠状切取脑片 6 片,第 3 片用于组织学检查,予以 4%甲醛固定,不同浓度
乙醇脱水,石蜡包埋等处理,以每片 5µm 厚连续冠状切片。余下的 5 张脑片用 TTC
染色来观察脑梗死体积改变。结果:⑴本实验用线栓法制作的局灶性脑缺血模型稳
定可靠,重复性强。⑵术后进行神经缺损评分发现,由于麻醉和手术创伤的影响,
假手术组术后出现 6~24h 神经功能减退。与假手术组相比,在 6h~24h 时间段盐水
组神经功能下降明显(p<)。依达拉奉组神经功能明显好于盐水组(p<)。术后 7
天盐水组和依达拉奉组神经功能基本恢复。⑶术后 6h~7d 假手术组脑水含量几乎没
有变化,盐水组脑含水量增加明显,术后 48h 到达高峰,明显高于依达拉奉组(p<)。
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新疆医科大学医学硕士学位论文
⑷在术后各个时间点,实时荧光定量 PCR 检测盐水组中脑缺血周围组织 AQP9mRNA
相对假手术组表达明显上调(p<)。在盐水组和依达拉奉组中,脑缺血后 6h 脑缺
血周边 AQP9mRNA 表达开始逐渐上调,72h 到达高峰,而后开始下调,至 7d 两组
表达水平仍高于假手术组;同时还发现在术后各个时间点盐水组和依达拉奉组
AQP9mRNA 表达水平均明显高于假手术组(p<);AQP9mRNA 表达水平与脑含水
量相一致,相关性分析显示二者密切相关(r=,p<)。⑸在依达拉奉组和盐水
组中,缺血 24h 脑梗死体积最大;与盐水组相比,术后 6~24h 依达拉奉组脑梗死体
积明显减小(p<)。⑹HE 染色显示术后 6h 在脑缺血区神经元细胞无明显改变,6h
后缺血区脑组织逐渐出现肿胀与坏死;在依达拉奉组,脑水肿和神经元坏死病理损
害明显较轻,在假手术组脑组织无明显改变。结论:⑴本实验采用大鼠中动脉线栓
法,成功地建立了稳定的局灶性脑缺血大鼠动物模型,重复性强,此模型接近临床
脑缺血发生过程,适于急性实验研究。⑵盐水组中 AQP9mRNA 表达水平明显高于
假手术组,且 AQP9mRNA 表达水平与脑水含量存在时间上的相关性。表明
AQP9mRNA 表达水平与缺血后脑水肿的形成密切相关。提示 AQP9 可能在脑缺血后
脑水肿的形成和继发损伤中产生重要作用。⑶依达拉奉组中脑梗死周边组织脑含水
量和 AQP9mRNA 水平与盐水组相比降低明显;依达拉奉作为自由基清除剂能有效
地抑制 AQP9mRNA 表达和改善脑水肿。提示依达拉奉可能是通过抑制 AQP9mRNA
表达和改善脑水肿发挥脑保护作用。AQP9mRNA 表达水平的调节和修饰将成为防止
脑水肿及减轻卒中后脑损害新的策略