高质量DNA获取方法之月桂酸钠法.doc

从组织中获取DNA难吗?不难,真不难。高一就有开设的从鸡血中获取DNA的生物实验课,很简单的几步就可以得到DNA。但要想获取高质量的DNA,尤其是从一些富含多糖、多酚、淀粉、纤维和蛋白的组织,后面用于酶切、高通量测序大片段文库的构建,还是有一定的难度的。最近协助北京农业生物技术研究中心一个老师提取桃叶片DNA还是遇到了一些困难,因为老师要做桃的个体重测序,因此对DNA的要求还是非常高的。之前跟其他很多老师交流植物DNA的提取,大多数目前仍然使用CTAB法,有些老师购买试剂盒进行提取,其实很多植物DNA提取试剂盒成分也是CTAB。CTAB法是提取植物DNA非常经典方法,但在提取的过程中由于要在65℃水浴中放置1个小时,因此耗时较长。我们在使用该法提取桃DNA时,获得DNA中含有大量的蛋白和多糖,虽然通过多次的苯酚***仿抽提可以大部分去除,但DNA得率较低。在这里给大家分享一种快速获取植物高质量DNA的方法,供大家在提取植物DNA时作为参考,用该法提取的植物DNA完全满足后续酶切、BAC文库构建、高通量测序大片段文库构建,将该法称之为月桂酸钠法。月桂酸钠抽提缓冲液:Tris-Hcl()100mmol/L;NaCl100mmol/L;EDTA()20mmol/L;月桂酸钠1%;配法:,月桂酸钠 10g置于1000mL烧杯中,加入100ml Tris-Hcl(1M)以及40mLEDTA()、800mlddH2O,,定容至10000mL,灭菌后室温保存。月桂酸钠英文名称:sodiumlauroylsarcosine 分子式:C15H28NaO3N,分子量:。以该法大量获取玉米叶片DNA为例的实验流程:  (1)选取适量的玉米幼苗新鲜叶片,以纱布捆扎,做好标记,置于液氮中保存;  (2)研钵以液氮预冷,将玉米叶片置于研钵中,倒入液氮,迅速研磨至粉末级,期间时时加入液氮,防止研磨过程中DNA被降解;  (3)将研磨好的粉末移入灭菌后的50mL抽提试管中,用移液管加入10mL月桂酸钠抽提缓冲液,反复缓慢的摇匀;  (4)用移液管向50mL抽提试管中加入等体积(10mL)酚:***仿:异戊醇(25:24:1),反复缓慢的摇匀;  (5)12000rpm,4°C离心20min后取出,小心吸取上清液16mL于新灭菌的50ml抽提试管中;  (6)向上述抽提试管中加入12mL异丙醇,上下缓慢颠倒数次,有白色絮状沉淀析出,颠倒时注意往一个方向,防止沉淀散开,不利于后续实验;  (7)将白色絮状沉淀用枪头从抽提试管中轻轻挑出,至于2mLEP管中;  (8)%乙醇,反复轻轻震荡洗涤,4°C,12000rpm,高速离心15min,弃上清,重复此步骤两次;  (9)将得到的白色沉淀再次4°C,12000rpm短暂离心数秒,以移液器吸干残留乙醇;  (10)白色沉淀置于37°C干燥箱中,使残存的70%乙醇全部挥发干净,这个过程中要经常拿出观察,防止过度烘干,不利于后面溶解; (11)待白色沉淀变透明后,(),放置于65℃恒温箱中,期间轻微弹匀,使DNA充分溶解; (12)DNA完全溶解后,加入5μL RNase(0.