人(human)白介素4(il4)定量检测试剂盒(elisa)两步法.doc

本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人(Human)白介素4(IL-4)ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双蛋白两步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预包被捕获蛋白的透明微孔中,依次加入标准品、标本,温育并洗涤后,再加入HRP标记的检测蛋白,温育并洗涤后,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测蛋白浓度呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。样品收集、:使用不含热原和内***的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品酶标仪(450nm)高精度加样器及枪头:-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。标准品临使用时再稀释,稀释后用剩的标准品应立刻丢弃,不可保存。实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×-HRP6mL3mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无试剂的准备标准品:标准品(1600pg/mL)在实验前用标准品稀释液进行倍比稀释,得到6个浓度点(包括标准品点):1600、800、400、200、100、50pg/×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释。洗板方法手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板4-5次。自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板4-5次。操作步骤从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条密封放回4℃。除空白孔外,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍),用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育30min。弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。除空白孔外,每孔加入检测蛋白-HRP50μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育30min。重复步骤3的操作。每孔加入底物A、B各50μL,轻轻振荡混匀,37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处