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特殊染色.doc
文档介绍:
字号:大中小第一节结缔组织和肌纤维染色VanGieson苦味酸酸性复红法(VG法)用途:VG法用于区分胶原纤维和肌纤维。原理:酸性复红和苦味酸对这两种纤维都具有较强的亲合力,结果胶原纤维被酸性复红染成红色,肌肉被苦味酸染成黄色。此方法是一种优良的传统方法。固定:10%福尔马林切片:4-6微米试剂:Weigert铁苏木精液:A液:苏木精1g,无水酒精100ml。一般配制后需要数周或数月自然氧化,成熟后使用。B液:29%三***化铁水溶液4ml,蒸馏水95ml,盐酸1ml。两液分别配制,临用时A、B液等量混合,过滤后使用。24h后失去染色能力。VanGieson液:1%酸性复红水溶液   10ml苦味酸饱和水溶液   90ml临用时1:9混合过虑后使用。 VanGieson苦味酸酸性复红法(VG法)步骤:1. 石蜡切片脱蜡至水。2. Weigert苏木精液5-10min。3. 充分水洗。4. VanGieson液1-5min。5. 95%酒精迅速分化数秒。6. 无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。结果:胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色。体会与说明:由于酸性复红退色较快,染色结果不能长期保存,一般只能保存3~6个月。 二Masson三色法试剂:Regaud氏苏木精:苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml。将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用。Masson丽春红酸性复红液:丽春红0.7g,酸性复红0.3g,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml。0.2%冰醋酸水溶液:冰醋酸0.2ml,蒸馏水100ml。1%磷钼酸水溶液:磷钼酸1g,蒸馏水100ml。苯***蓝水溶液:苯***蓝2g,蒸馏水98ml,冰醋酸2ml。1%光绿水溶液:光绿1g,蒸馏水100ml。Masson三色法步骤1. 石蜡切片脱蜡至水。2. 铬化处理或去***盐沉淀(甲醛固定的组织此步可略)。3. 依次自来水和蒸馏水洗。4. 用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min。5. 充分水洗,如过染可盐酸酒精分化。6. 蒸馏水洗。7. 用Masson丽春红酸性复红液5-10min。8. 以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。9. 1%磷钼酸水溶液分化3-5min。10.             不经水洗,直接用苯***蓝或光绿液染5min。11.             以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。12.             95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固。结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色(如光绿液染色为绿色),胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色。体会与说明:1.控制好染色步骤。2.组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间。3.0.2%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳。4.磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制,肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可。 弹力纤维染色Schmorl染色法石炭酸-品红液:碱性品红2g,无水酒精50ml,熔化石炭酸25ml,在37℃温箱过夜,冷后过滤。Weigert间苯二酚-品红液:碱性品红1g,间苯二酚(Resorcin)晶体2g,蒸馏水100ml。      在锥形烧瓶内煮沸,加29%三***化铁水溶液12.5ml搅拌并继续煮沸2-5mine。冷后过滤,烘干滤纸及沉淀,放入烧瓶并加95%酒精100ml在水浴加温至染料全溶解,待冷却后过滤,并补足因加热蒸发的酒精至100ml。最后加浓盐酸2ml摇匀备用。弹力纤维Schmorl染色法步骤1. 石蜡切片脱蜡至水。2. 石炭酸-品红液37℃染1h,或室温24h。3. 70%酒精漂洗。4. Weigert间苯二酚-品红液染色20-30min。5. 无水酒精分色约1/2h,如染色过度也可改用0.5%盐酸的95%酒精分色。6. 流水冲洗后换蒸馏水漂洗。7. 常规苏木精染核5-10min。8. 水洗。9. VanGieson液复染3-5min。10.             蒸馏水洗。11.             酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。结果:弹力纤维蓝黑色,胶原纤维红色,肌纤维黄色,细胞核蓝色 弹力和胶原纤维染色法试剂:维多利亚蓝染色液:维多利亚蓝(Victoriablue上海)2.0g,糊精   0.5g,间苯二酚4.0g,蒸馏水   200ml。混合后加热煮沸,边煮边搅拌,约5min。再将30%三***化铁水溶液25ml煮沸后加入上述混合液中,继续煮沸3min,要不断搅拌,搅拌棒上会出现胶样物质。然后终止加热,冷却后过滤。将滤纸上的物质连同滤纸放入60℃恒温箱中烤干。再将烤干的蓝色粉末连同滤纸溶于400ml70% 内容来自淘豆网www.taodocs.com转载请标明出处.