慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体P2X7和A3对视网膜神经节细胞作用的体内的研究.pdf

慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体与对视网膜神经节细胞作用的体内研究中文摘要研究背景:专业:学位申请人:眼科学胡慧玲张秀兰教授导师:青光眼是全球第二位致盲性眼病,其防治己成为重要的公共卫生问题。升高的眼内压是青光眼发生和进展的最主要危险因素,其导致的最终结局是视网膜神经节细胞凋亡。然而,高眼压下凋亡的机制尚未完全清楚。已有研究表明神经营养物质的剥夺、兴奋性谷氨酸的毒性及一氧化氮的氧化损伤等都与其相关。近年研究发现,嘌呤及其受体也参与了存活与凋亡的调节。前期研究表明:在体外混合及纯化培养的中,芴錚募せ羁芍翿蛲觯佘及其受体的激活具有拮抗凋亡作用。但以上结果仅来源于体外细胞实验,嘌呤受体的体内作用亟待证实。然而,进行体内作用研究的前提是要有较为理想的动物模型。慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体与对视网膜神经节细胞作用的体内研究
本课题的研究主要分为以下三个部分:第一部分慢性高眼压大鼠模型的建立一、研究目的:研究方法:二、目前研究中常用的高眼压动物模型有急性和慢性两种,慢性高眼压模型是研究凋亡的主要手段,常用的造模方法有激光光凝、静脉烧灼等。但这些模型大部分仅着眼于高眼压产生的某一方面机制,有一定局限性。采用巩膜表面静脉注射高渗盐水法建立的大鼠慢性高眼压模型,其在发生机制上与人类青光眼最相近,是一种较好的研究青光眼的手段。本课题拟采用巩膜表面静脉注射高渗盐水法建立大鼠慢性高眼压模型。首先检测玻璃体腔三磷酸腺苷ǘ燃笆油鞍妆泶锼剑教致愿眼压状态下的嘌呤水平。其次,在大量体外研究结果基础上,研究芴錚腺苷受体对体内凋亡及存活的作用。本研究建立的慢性高眼压大鼠模型,为后续研究提供了较好的高眼压大鼠供体;通过探讨嘌呤及其受体在青光眼发病机制及神经保护中的作用,为青光眼研究提供新的视角,为青光眼干预治疗提供可能的靶点,具有一定的研究意义。采用巩膜表面静脉注射高渗盐水法建立大鼠慢性高眼压模型,分析凋亡趋势,为后续的实验研究提供稳定可靠的慢性青光眼大鼠供体。采用成年雄性甆笫螅已畚6哉兆椋笱畚J笛樽椤J笛樽楣膜表面静脉注射高渗盐水,建立慢性高眼压大鼠模型。以垩辜朴谑前一周至术后天每日固定时间监测清醒状态下双眼眼压变化。实验组术后天内眼压平均值高于对照组游Q垩乖龈摺T只大鼠造模尝试成功基础上,对只成功造模的大鼠进行数据分析。术后第天,上丘逆行标记,术后第慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体与对视网膜神经节细胞作用的体内研究中文摘要
三、研究结果:慢性高眼压大鼠模型玻璃体液笆油鞍姿四、小结:第二部分测定一、研究目的:二、研究方法:天,视网膜平铺片并计数,分析高眼压下凋亡规律。如凋亡呈青光眼性凋亡规律,结合眼压增高,视为造模成功。只成功建立的大鼠慢性高眼压模型中,实验组术后天眼压开始升高,比较术后天眼压平均值,,由周边到中央区域数量分别减少。ァ成功建立慢性高眼压大鼠模型,其凋亡符合青光眼性凋亡规律,可以用于后续研究。在成功建立的慢性高眼压大鼠模型中,研究高眼压下玻璃体液ǘ取⑹油蛋白表达水平与眼压的关系。建立慢性高眼压大鼠只,右眼为对照组,左眼为实验组。以艮:压计,于术前一周至术后天,每日固定时间监测清醒状态下双眼眼压变化。于术后第天,通过干冰速冻法获取玻璃体液及视网膜,应用萤光素/%.慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体与对视网膜神经节细胞作用的体内研究中文摘要..,
芴錚胂佘帐芴錋訰奶迥谧饔醚芯四、小结:第三部分一、研究目的:二、研究方法:实验组术后天眼压平均值为..,对照组为..,。术后第天,实验组玻璃体液ǘ任6哉兆榈倍;实验组视网膜蛋白表达水平为对照组的叮痪臣蒲Х治觯A逡篈浓度、视网膜蛋白表达水平分别与眼压变化呈一阶线性回归关系直为,慢性高眼压大鼠模型中,玻璃体液ǘ燃笆油鞍妆泶锼皆高;且随着眼压的升高,二者与眼压变化呈一阶线性回归关系。表明高眼压状态下,体内嘌呤水平呈上调趋势。运用芴錚匾煨约ざ良稗卓辜劣胂佘帐芴錋匾煨约ざ炼蕴迥进行药物干预,初步探讨二者的激动剂或拮抗剂对体乃鹕嘶虮;ぷ用。∪〈笫唬靑贝受体特异性激动剂蕴迥赗闹碌亡作用。于实验第一天行玻璃体注射,随机选取一眼设为实验组,另一眼设为对照组。实验组注射,对照组注射同等剂量平衡盐溶液S谑笛榈谒天,上丘逆行标记。于实验第七天,采用视网膜平铺片,在荧光显微镜下观察并计数,对结果进行统计学分析。‘慢性高眼压大鼠模型建立和嘌岭受体与对视网膜神经节细胞作用的体内研究中文摘要
结论:三、研究结果:四、小结:贐能明显降低体赗康氖笛榻峁∩希忠韵氯檠芯縋受体拮抗剂及腺苷受体激动剂对体赗谋;ぷ饔谩S谑笛榈谝惶煨胁A遄射,随机选取一眼设为实验组