角膜内皮细胞体外培养及研究.pdf

角膜内皮细胞体外培养的研究中文摘要角膜内皮细胞形态学上的完整和功能上的健全是临床上评价角膜功能的指标,也是角膜保存质量评定的标准。观察药物及一些因素对角膜内皮细胞活性的影响离不开角膜内皮细胞的体外试验,而体外试验的成功也依赖于良好的角膜内皮细胞培养。角膜内皮盲是角膜病的一种常见病,角膜内皮细胞的体外培养对于角膜生物学、病理学、药理学以及角膜移植的研究具有重要的意义,也是体外构建组织工程化人工角膜的重要研究内容之一。本论文通过对角膜内皮细胞体外原代培养和传代培养的方法进行筛选和优化,确定角膜内皮细胞原代培养的方法:揭膜培养法:角膜缘内胰〗悄つ谄は赴悖谄康祝蛊涮谏ぃ可以获得六角形单层内皮细胞。不使用苊饷付阅谄は赴乃鹕恕2需较多材料。消化培养法:材料较多时,采用消化培养法,培养中需控制南时间和浓度:接种细胞易贴壁。组织块培养法:角膜材料较少,采用组织贴片培养法,方法简便易行,细胞迁出和生长速度较快,避免了韵赴乃鹕耍赴ば翁!通过研究,确定了角膜内皮细胞最适培养液为/J笛榻峁表明其生长效果较好。角膜内皮细胞传代培养方法:从酶的浓度、酶的用量、酶作用的时间、洗涤离心等方面进行了研究,得到了适合角膜内皮细胞的传代方法。首次进行了促进角膜内皮细胞生长的海洋生物提取物的筛选研究,以解决内皮细胞生长缓慢,传代困难的问题;实验结果表明,筛选的各海洋生物提取物对角膜内皮细胞生长均有一定的促进作用;,与饔孟嗟薄S隕相比,成本低廉,有望在角膜内皮细胞的
角膜内皮细胞在多糖生物膜材料上培养实验结果表明:角膜内皮细胞在多糖生物膜上贴附和生长情况良好,表明内皮细胞与多糖生物膜有良好的生物相容性。在角膜内皮细胞贴附载体膜培养过程中,配合使用壳寡糖、乙酰氨基葡萄糖和细胞生长因子梢源俳悄つ谄は赴谀ど系纳ぃ***工活性内皮细胞载体膜所需时间大大缩短,为人工活性角膜的构建提供了一角膜内皮细胞冷冻保存实验结果表明:甘油作为角膜内皮细胞的保护液进彳亍深冷冻保存的效果较好,在%的甘油保护液中保存,细胞复苏成活率较高,细胞形态正常。在细胞的保存过程中,以/的冷平衡时间较好,细胞成活率较高,细胞形态正常。复温方法实验结果表明:嫠「次戮苫竦较高的细胞成活率,但前者容易导致角膜内皮细胞的损伤。体外培养和组织培养中得到应用。定的基础。关键词:角膜内皮细胞培养海洋生物提取钫多糖生物膜细胞保存
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角膜内皮细胞体外培养的研究第一章角膜内皮细胞增殖的研究进展成角膜内皮细胞。晶体的存在是角膜正常发育的条件,如果在间充质细胞长入之个月时,内皮细胞开始形成它的基底膜’ぁT诔錾保悄つ谄さ,是位于角膜后部的单层细胞,状态、角膜厚度、透明度方面起着关键作用。研究证实,角膜内皮细胞在成年后没有明显的增殖现象,可导致细胞密度逐渐减少。作为对角膜内皮减少的代偿作用,角膜内皮细胞通过细胞扩张及移行而不是细胞增殖来维持单层细胞的连续性,从而保持正常功能。当角膜内皮细胞密度下降到某一个临界值,上述机制无法代偿时,角膜就会丧失其透明性,变得水肿混浊。由于角膜内皮细胞失代偿而造成的视力丧失称为角膜内皮盲,目前只能通过角膜移植来治疗。因此,关于角膜内皮细胞增殖的研究具有重要意义。一、角膜内皮细胞的胚胎发生学:胚胎学研究表明,角膜在孕期局左右开始形成。由表皮外胚层形成角膜表皮细胞及其下基质层,约第苁保晌挥诮悄ぴ抵芪У募涑渲氏赴鸾バ前晶体消失,会导致小眼球和不透明角膜。大约在孕期天左右,角膜形成了上皮层,无细胞的胶原纤维基质层和内皮层。试验研究证明:此时神经元蛋白的单克隆抗体对内皮细胞染色呈强阳性,提示内皮细胞可能不是来源于中胚层,而最初的角膜内皮是由连续的细胞构成,并且细胞之间有较宽的细胞间隙。内皮细胞间隙的紧密连接及侧膜上各种类型的连接,发育较为缓慢。大约在第厚度可以达到,、。内皮细胞间隙的紧密连接直到出生一段时间后才能发育成熟,但是对内皮细胞通透性的生理性研究发现,这些紧密连接与细胞通透性无明显相关角膜内皮细胞前面与后弹力层相连,后面与房水相接触。角膜内皮细胞在维持正常角膜半脱水是来源于神经瘠。
性。另外,在内皮细胞发育过程中,细胞外基质蛋白也发生变化。甊等对鼠角膜内皮细胞发育的研究表明:在新生鼠,层粘连蛋白和纤维粘连蛋白分散地分布于细胞内,而在内皮细胞停止增殖的苁螅秸叻植加谙赴洹不再增殖。。而其它物种缡的角膜内皮细胞在外伤刺激下或在体外培养中能较快地增殖。人们曾怀疑人角膜内皮细胞是本身缺乏增殖能力还