液相串联质谱法在生物样品分析中的几个关键问题.ppt

LC/MS/MS在生物样品分析时的关键问题
吉林大学药物代谢研究中心

顾景凯
吉林大学药物代谢研究中心
2018/1/27
简介
LC/ESI-MS/MS是近10年来发展成熟的分析技术,它集高效液相色谱的高分离性能与质谱的高灵敏度、高选择性的优点于一体,已成为定量测定生物样品中药物及其代谢产物的最强有力分析手段。

然而,它在分析生物样品过程中也碰到了具有挑战性的问题—基质效应,对于以人参皂苷为代表的中性、热不稳定、难于离子化的皂苷类化合物来说,基质效应的影响更为严重。

离子抑制效应不仅影响检测的灵敏度,也影响定量的准确性,因为这种抑制效应在不同个体的相同生物基质间、甚至同一个生物样品在不同的色谱保留时间可能均不一样,这样就会使测试结果的准确性受到严重影响。
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基线
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Time, min
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Intensity, cps
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血浆样品经液液萃取处理得到的谱图
Intensity, cps







Time, min
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Intensity, cps







Time, min
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血浆样品经SPE处理得到的谱图
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尿样经液液萃取处理得到的谱图
Intensity, cps







Time, min
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Intensity, cps







Time, min
20%
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尿样经2次水洗后的液液萃取处理得到的谱图
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考察基质效应方法
柱后补偿技术(Post-column addition/infusion, PCA/PCI)
补偿标准品溶液,以空白基质提取物进样测定----位置、强度
标准溶液进样; 等量的标准溶液加入空白基质提取物中进样;二者峰面积比较
液相系统
色谱柱
质谱
三通阀
注射泵
基质效应产生原因
外源杂质的引入(不同厂家生产的试管、肝素锂)
生物样品内源性基质共洗脱作用co-elution
生物样品与分析物形成新的化合物
柱超载作用(column overload)
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影响检测的灵敏度
1
影响定量的准确性
2
基质效应的结果