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基因工程原理****题参考答案基因工程原理****题集参考答案一、名词解释1、DNA分子克隆技术:克隆,指含有单一的DNA重组体的无性繁殖系,或指将DNA重组体引入宿主细胞建立无性繁殖系的过程。DNA分子克隆技术也称基因克隆技术,是在体外将DNA分子片段与载体DN***段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程。其基本步骤包括:制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或DN***段的大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆,就可以深入分析基因的结构与功能,随着引入的DN***段不同,有两种DNA库,一种是基因组文库,另一种是cDNA库。2、分子杂交:两条不同来源的DNA(或RNA)链或DNA与RNA之间存在互补顺序时,在一定条件下可以发生互补配对形成双螺旋分子,这种分子称为杂交分子。形成杂交分子的过程称为分子杂交。3、限制性片段长度多态性:从不同个体制备的DNA,使用同一种限制性内切酶酶切,切得的片段长度各不相同。酶切片段的长度可以作为物理图谱或者连接图谱中的标记子。通常是在酶切位点处发生突变而引发的。4、报告基因:一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个表达产物非常容易被鉴定的基因、5、多聚酶链式反应(PCR):一种体外扩增DNA的方法。PCR使用一种耐热的多聚酶,以及两个单链引物。以过高温变性将模板DNA分离成两条链。低温退火使得引物和一条模板单链结合,然后是中温延伸,反应液的游离核苷酸紧接着引物从5/端到3/端合成一条互补的新链。而新合成的DNA又可以继续进行上述循环,因此DNA的数目不断倍增。6、核酸的凝胶电泳:将某种分子放到特定的电场中,它就会以一定的速度向适当的电极移动。某物质在电场作用下的迁移速度叫做电泳的迁移率,它与电场强度成正比,与该分子所携带的净电荷数成正比,而与分子的摩擦系数成反比(分子大小、极性、介质的粘度系数等)。在生理条件下,核酸分子中的磷酸基团是离子化的,所以,DNA和RNA实际上呈多聚阴离子状态。将DNA、RNA放到电场中,它就会由负极向正极移动。在凝胶电泳中,一般加入溴化乙锭进行染色,此时,核酸分子在紫外光下发出荧光,肉眼能看到约50ngDNA所形成的条带。7、细菌转化:所谓细菌转化,是指一种细菌菌株由于捕获了来自另一种细菌菌株的DNA,而导致遗传特性发生改变的过程。这种提供转化DNA的菌株叫做供体菌株,而接受转化DNA的菌株则叫做受体菌株。大肠杆菌是使用最广泛的实验菌株。8、反义核酸:指与靶DNA或RNA碱基互补,并能与之结合的一段DNA或RNA。9、RNAinterference:是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA导入细胞后,能特异性地降解该mRNA,从而产生相应的功能表型缺失,这一过程属于转录后基因沉默机制范畴。10、Spi:λ噬菌体体重组克隆的一种筛选方法,其筛选方法是Spi+:(p2);Spi-:λ(red-gam-)(p2),形成小噬斑/hostrecA+/chi。λ包装时若gam-,需recA产物的作用才可形成噬斑(但为小噬斑),所以对宿主菌有要求(recA+)但recA+可引起其它重组:载体改为red-/gam+可在recA-受体中增殖。11、DNA文库:将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段,并与合适的载体重组后导入宿主细胞,进行克隆。这些存在于所有重组体内的基因组DN***段的集合,即基因组文库,它包含了该生物的所有基因。12、cDNA:cDNA是指以mRNA为模板,在逆转录酶的作用下形成的互补DNA。13、cDNA文库:以细胞的全部mRNA逆转录合成的cDNA组成的重组克隆群体称为cDNA文库。14、DNA探针:是带有标记的一段已知序列DNA,用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。15、转导(作用):借助于病毒载体,遗传信息从一个细胞转移到另一个细胞。16、染色体步移:通过相互重叠的基因组克隆之间进行一连串杂交从而实现染色体上基因的定位。17、斑点杂交:将被检标本点到膜上,烘烤固定后与探针进行杂交。这种方法耗时短,可做半定量分析,一张膜上可同时检测多个样品。18、plementation:质粒载体重组克隆的筛选方法,LacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶阴性的突变体之间实现互补。LacZ△M15:放在F质粒上,随宿主传代;LacZ’:放在载体上,作为筛选标记。19、菌落原位杂交:将细胞从培养平板转移到***纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂解