“小绿萼”梅离体快繁体系的建立.doc

“小绿萼”梅离体快繁体系的建立摘要:以梅花品种小绿萼1年生枝条为试验材料,研究了采样时间、初代培养基、基本培养基和激素组合等对带芽茎段离体繁殖的影响。结果表明:(1)最佳采样时间为4―6月;(2)最佳腋芽诱导培养基为1/2MS+-BA+05mg/LKT+;(3)最佳增殖培养基QL+-BA+,增殖系数为427;(4)无菌苗在200mg/LIBA浸渍处理数秒后,移植到1/2QL培养基中,生根率为80%。关键词:梅花;离体快繁;茎段;培养基中图分类号:+3文献标志码:A文章编号:1002-1302(2015)04-0062-03收稿日期:2014-05-09基金项目:国家自然科学基金(编号:31070624);国家“863”计划(编号:2011AA100207)。作者简介:杨丽青(1986―),女,山西朔州人,硕士,从事园林植物遗传育种研究。E-mail:1270063665@。通信作者:张俊卫,博士,副教授,从事园林植物遗传育种研究。E-mail:******@.。梅是原产中国的传统名花,有悠久的栽培历史和丰富的栽培品种,具有极高的观赏价值和经济价值。在生产上,梅花以扦插、嫁接等无性繁殖为主,虽然能保持品种的优良性状,但是繁殖系数小,周期长。利用组培快繁技术,不仅可在短期内快速大量繁殖基因型一致的优质苗木,而且可获得无病毒苗木,大大加快了育苗进程和提高了苗木质量。自Harada等[1]开展梅茎段离体繁殖以来,国内外在梅的离体快繁上取得了较快的进展[2-5],但目前仍存在建立快繁体系的梅花品种少,部分品种在快繁过程中出现顶芽坏死、叶片黄化等难题。小绿萼是武汉地区的梅花老品种,具有极高的观赏价值。本研究旨在分析茎段采集时间、启动和增殖培养基对小绿萼离体繁殖的影响,以期建立其快繁体系,为该品种的应用推广提供一定的基础。,除8―9月份停止采样,分别在3―11月中旬采集梅花品种小绿萼(图1-A)1年生枝条,用冰盒带回实验室。~2cm长的具节茎段,每茎段1~2个腋芽。用洗洁精浸泡10~20min,流水冲洗30min后在超净工作台上用75%乙醇浸润30s,%HgCl2中消毒8~15min,然后用无菌水冲洗6~7次,无菌滤纸拭干后接种于初代培养基(1/2MS+-BA+);为分析不同初代培养基对腋芽诱导的影响,以4月中旬采集的小绿萼枝条为材料,灭菌后接种至2种不同初代培养基:1/2MS+-BA+01mg/LNAA和1/2MS+-BA++。每处理20个外植体,重复3次,接种30d后统计诱导率,污染率在接种后10~15d内统计。~2cm的腋芽切下,--BA和NAA组合的QL培养基中,观察腋芽的增殖,每处理10个外植体,重复3次,记录植株高度,生长情况,接种5周后统计腋芽增殖情况。(、~1、1~2cm)时,将其从基部切下,放入继代培养基(1/2MS+-BA++)中观察其生长,每处理5个外植体,重复3次。,株高超过2cm的试管苗在5种生根培养基中进行生根培养。移栽时先将生根苗连培养瓶一起置于温室内进行为期10d的炼苗,在此期间逐渐松开并揭去培养瓶的盖子,而后将植株根系上的培养基洗净,移栽到含有泥炭∶蛭石=1∶1(体积比)的塑料盆中。移栽后的第1周塑料盆上覆盖塑料薄膜以保湿,1周后慢慢揭去。(23±2)℃,空气相对湿度为60%左右,光照度为1500~2000lx,光照周期为14h/d。,2周后腋芽开始伸长,叶片逐渐展开,叶色浓绿(图1-B)。不同时间采集的枝条在初代培养时,污染率和腋芽诱导率差异显著(表1),4月至6月中旬是最佳采样时期,既可以保证较高的腋芽诱导率,而且污染率相对较低,其他时期采集的枝条污染率高,腋芽诱导率低,不适宜用作离体培养的外植体。,接种于2种不同初代培养基中(表2),培养于添加KT的初代培养基中的外植体,不仅腋芽诱导率高,而且芽伸长快,叶色浓绿,无顶芽死亡、黄化问题。这与