对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法(修订稿).doc

对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法(修订稿)附件对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法(修订稿)保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定Items,PrinciplesandResultAssessment1试验项目动物实验分为方案一(刀豆蛋白A急性肝损伤模型)、方案二(急性酒精性肝损伤模型)和方案三(亚急性酒精性肝损伤模型)(刀豆蛋白A急性肝损伤模型)(ALT)(AST)(LDH)(急性酒精性肝损伤模型)(TG)(VLDL)(亚急性酒精性肝损伤模型)(CHOL)(LDL)(TBIL)。,方案一、方案二和方案三任选其一进行动物实验。3结果判定方案一(刀豆蛋白A急性肝损伤模型)在模型成立的前提下,ALT、AST和LDH中任两项血液生化指标阳性和病理结果阳性,可判定受试样品对化学性肝损伤有辅助保护功能。方案二(急性酒精性肝损伤模型):血清中TG、VLDL指标阳性和病理组织学检查结果阳性,可判定该受试样品具有对急性酒精性肝损伤有辅助保护功能功能。方案三(亚急性酒精性肝损伤模型):①血清中CHOL、LDL和TBIL三项检测指标结果阳性,可判定该受试样品具有对亚急性酒精性肝损伤有辅助保护功能作用;②血清中CHOL、LDL和TBIL三项指标中任两项结果阳性,且肝脏病理组织学检查结果阳性,可判定该受试样品具有对亚急性酒精性肝损伤有辅助保护功能功能。在急性或亚急性酒精性肝损伤结果判定中,任何一项方案为阳性时,可认为该受试物具有降低酒精性肝损伤危害功能。对化学性肝损伤有辅助保护功能检验方法MethodfortheAssessmentofAssistingtheProtectionAgainstChemicalInjuryofLiverFunction1方案一(刀豆蛋白A急性肝损伤模型)(concanavalinA,ConA)是一种在人体内对肝细胞有特异性毒性作用的植物凝集素,它能在体外激活T细胞的丝裂原,进入循环后首先活化T淋巴细胞,继而激活肿瘤坏死因子(TNF)和白介素2等细胞因子,引发炎症反应,可诱导淋巴细胞、巨噬细胞的细胞毒作用,通过肝细胞凋亡等多种途径损伤肝细胞。,单一性别,大鼠(180-220克),每组8-12只;小鼠(18-22克),每组10-15只。,同时设阴性对照组和模型对照组,必要时设溶剂对照组。以人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)一个剂量(等效应剂量),另设二个剂量组,最高剂量不得超过人体推荐量(以公斤计算)的30倍。,无法灌胃时将受试样品掺入饲料或饮水亦可,并记录每只动物的饲料摄入量或饮水量。原则上连续给予30天,必要时可延长至45天。,阴性对照组和模型对照组给予纯净水。将动物每周称重两次,以调整受试样品剂量。模型组及各样品组于实验结束时一次尾静脉给予剂量为15~20mg/kg的刀豆蛋白A,小鼠10ml/kgBW,禁食8h后经腹腔注射60mg/kgBW的戊巴比妥钠溶液麻醉,腹主动脉采血,并取肝组织,进行各项指标的检测及病理组织学检查。、血清中谷丙转氨酶(ALT)、血清中谷草转氨酶(AST)、血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肝脏病理组织学变化。、、AST推荐采用速率法,LDH推荐采用乳酸为底物的速率法(LD-L法)。血样离心(2500rpm)后取上清,血清中的ALT、AST和LDH的检测采用用全自动或半自动生化分析仪进行。,但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。方差齐,计算F值,F值<,各组均数间差异无显著性;F值>,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计。,血清ALT、AST和LDH含量升高有统计学意义(P<),表示模型成立。在模