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文档列表
文档介绍
蛋白质的SDS—PAGE电泳
侯国俊
周希彬
马丽娜
关欣
1
2
电泳原理
3
电泳中的不正常现象
4
目录
发展历史,分类
样品处理 PAGE胶
发展历史
1967年由Shapiro建立
1969年由Weber和Osborn进一步完善
目前已成为分子生物学实验中常用的一项技术
分类
根据缓冲体系和凝胶孔径的不同:
连续电泳
不连续电泳
根据样品的处理方式不同:
还原SDS电泳
非还原SDS电泳
带有烷基化作用的还原SDS电泳
目前实验室常用不连续的还原SDS垂直电泳
根据电泳形式:
圆盘电泳
垂直电泳
水平电泳
平板电泳
垂直电泳装置
不连续电泳
用浓缩胶(上层胶)和分离胶(下层胶)两种不同浓度,不同PH值的凝胶灌制凝胶板,通过电荷效应,浓缩效应,分子筛效应,达到蛋白质高分辨率的分离
样品
样品缓冲液应包含以下部分:
SDS(十二烷基磺酸钠)
β—巯基乙醇(BME)
溴酚蓝
丙三醇
pH =-glycine
SDS
作用:
断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,与蛋白质以一定比例结合,从而使蛋白质带上负电荷并具有相同的质合比,在电泳时迁移速率仅与分子量有关
侯国俊
周希彬
马丽娜
关欣
1
2
电泳原理
3
电泳中的不正常现象
4
目录
发展历史,分类
样品处理 PAGE胶
发展历史
1967年由Shapiro建立
1969年由Weber和Osborn进一步完善
目前已成为分子生物学实验中常用的一项技术
分类
根据缓冲体系和凝胶孔径的不同:
连续电泳
不连续电泳
根据样品的处理方式不同:
还原SDS电泳
非还原SDS电泳
带有烷基化作用的还原SDS电泳
目前实验室常用不连续的还原SDS垂直电泳
根据电泳形式:
圆盘电泳
垂直电泳
水平电泳
平板电泳
垂直电泳装置
不连续电泳
用浓缩胶(上层胶)和分离胶(下层胶)两种不同浓度,不同PH值的凝胶灌制凝胶板,通过电荷效应,浓缩效应,分子筛效应,达到蛋白质高分辨率的分离
样品
样品缓冲液应包含以下部分:
SDS(十二烷基磺酸钠)
β—巯基乙醇(BME)
溴酚蓝
丙三醇
pH =-glycine
SDS
作用:
断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,与蛋白质以一定比例结合,从而使蛋白质带上负电荷并具有相同的质合比,在电泳时迁移速率仅与分子量有关
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