超滤-hplc法测定奥沙利铂脂质体的包封率..doc

超滤-HPLC法测定奥沙利铂脂质体的包封率         【摘要】目的:测定奥沙利铂脂质体的包封率。方法:采用超滤法分离脂质体中游离药物;用HPLC测定脂质体的包封率。结果:超滤能较好地把脂质体和游离药物分离,高、中、低浓度平均回收率符合测定要求;在所选色谱条件下,辅料不干扰奥沙利铂的定量测定;%。结论:该方法方便、快捷,可以用于奥沙利铂脂质体包封率的测定。奥沙利铂是继顺铂和卡铂后的第三代铂类抗癌药[1],对结肠癌有明显的作用[2]。但在抗癌的同时,也会产生不同程度的毒副作用。把奥沙利铂做成脂质体制剂可以减少其毒副作用。而包封率是脂质体制剂的一个重要指标,本实验旨在对奥沙利铂脂质体包封率的测定方法进行研究,建立了用超滤-HPLC法测定奥沙利铂脂质体包封率的方法,为奥沙利铂脂质体质量评价提供依据。 1仪器与试剂 (日本岛津公司LC-10AT泵,SPD-10A紫外检测器,浙大智达N2000工作站);765MC紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);RE-2000旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);AH100D均质机(ATSEngineeringInc);SartoriusBP211D电子天平(德国赛多利斯公司);MilliporeAmiconUltra-(Millipore,Carrigtwohill,Co,Cork,Ireland);TDL-40B离心机(上海安亭科学仪器厂)。 (自制);奥沙利铂(珠海远程医药化工有限公司,批号20110501);Triton-X100(Amresco,批号20110411);色谱纯甲醇;其他试剂为分析纯。 2方法与结果 。根据《中国药典》(2010版,附录XIXE微囊、微球与脂质体制剂指导原则),包封率计算公式如下: 包封率=■×100% 要测定包封率就要把游离药物分离出来,常用的分离游离药物的方法有:凝胶过滤法、透析法、鱼精蛋白沉淀法、超滤法等[3]。本文采用超滤法对奥沙利铂脂质体的游离药物进行分离,并测定其包封率,操作简单,省时。 :AgilentTc-C18柱(×250mm,5μm);流动相:甲醇-水(10:90);流速:1mL·min-1;检测波长:250nm;进样量:20μL;柱温:常温。 、奥沙利铂脂质体,破膜并稀释至适当浓度,另取奥沙利铂标准贮备液加水稀释到适当浓度,分别进HPLC,记录图谱,测定结果见图1。如图所示,辅料和溶剂对奥沙利铂脂质体的含量测定没有干扰。 ,,,,,,,1mg·mL-1的系列标准溶液,分别进HPLC,记录色谱图。以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归,得到回归方程为A=6348070C13431(n=7),R2=,~1mg·mL-1范围内峰面积与浓度线性关系良好。 ,加水稀释成浓度为适当浓度的奥沙利铂溶液,分别进HPLC,平行进样6次,记录峰面积,RSD=1