感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响 ..doc

感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响_.感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响罗锋,余腾,范丽梅(江汉大学医学院,湖北武汉430056摘要:通过研究转化实验中加入质粒DNA的量、大肠埃希菌感受态细胞制备和质粒转化过程中冰置时间长短对感受态细胞最终转化效率的影响,分析其最佳转化效率参数,,加入质粒(pBR322DNA量为1~10ng,感受态制备过程中菌液冰浴时间在30~60min,以及感受态细胞加入质粒DNA并混匀后的冰置时间为30min和120min时,其转化效率达到最高,在此范围之外,:质粒;感受态细胞;转化效率;冰浴时间中图分类号:Q785文献标志码:A文章编号:1673-014303-0082-04大肠埃希菌感受态细胞的制备与转化是分子生物学实验中最基本、最常用的操作技术之一,可用于重组质粒的转化、,***化钙处理大肠埃希菌细胞,,延长***化钙处理时间能提高质粒DNA的转化效率4~+、Mn2+、Rb+及Ca2+处理对大肠埃希菌感受细胞转化效率的影响,,,×106~2×107cfu/,大都集中于对菌种、OD600值、CaCl2浓度、保存方式、保存温度和时间等进行探究,,本研究就制备感受态细胞和质粒转化过程中冰置时间长短对感受态细胞最终转化效率的影响进行了初步研究,:大肠埃希菌(Escherichiacoli菌株DH52011年第3期罗锋,等:感受态细胞制备和质粒转化冰浴时间对大肠埃希菌转化效率的影响83实业有限公司;离心机(:①选用DH5L/管分装,:①取感受态细胞置冰上15min;②加入1ng纯pBR322质粒至感受态细胞;③冰上放置30min;④42℃水浴热激90s后,迅速置于冰上冷却2min;⑤加1mLLB液体培养基,混匀后37℃复苏45min;⑥取100菌株的转化效率均按照下式计算:转化效率/(cfug菌株转化效率的影响,按照标准方案中的方法,将“质粒转化标准方案”步骤②中pBR322的量作10倍比梯度(、、1、10、100、1000ng的改变,,将“感受态细胞制备标准方案”步骤③中收获细菌之后的冰置时间作