培养基的制备与分装-分析大课堂..doc

、溶解先在容器中加入所需水量的一半,然后按培养基配方依次将各种原料准确称取加入水中,用玻璃棒搅拌使之溶化,某些不溶解的原料如蛋白胨,牛肉膏等可事先在小容器中加入少量水加热溶解后再冲入容器中,有些原料需要量极少不易称量,可先配成高浓度的溶液,再按比例换算后取一定体积的溶液加入容器中,等原料全部放入容器后,加热使其充分溶解,在加热过程中应注意不断搅拌以防原料沉底烧焦,最后补足所需的全部水分。(pH)有的培养基需要一定的pH,常用盐酸或氢氧化钠溶液进行调整。最简单的调节方法是用精密pH试纸进行测定,即用玻棒沾一滴培养基,点在试纸上进行比色后,如pH偏酸则加1%氢氧化钠溶液,偏碱则加1%盐酸溶液,一次加量不宜太多,经反复几次调节后,即可基本调至所需pH,此法简便易行,但较粗放,需要较准确调节的,可用pH计测定。使用高浓度的碱液或酸液进行培养基pH的调整,可避免由于使用低浓度溶液调整因使用量过多而影响培养基的总体积和浓度,,并可节约工作时间,但宜分小量多次加入调节,不应操之过急。(1)纱布过滤用3~4层医用纱布放在漏斗内,将已配制培养基直接倾倒过滤,这种方法只滤去较粗的渣滓。(2)棉花过滤用小块脱脂棉塞在漏斗管的上口,使不致浮起也不要塞得过紧,先用少量的清水浸湿后,再将培养基倾入过滤,可得较透明的培养基,以供微生物计数和观察菌落特征及某些生化试验用。(3)高温澄清把制好的培养基,置于高压蒸汽灭菌锅里,×104Pa压力,保持30min,降压冷却后取出,静置数小时,即行澄清。液体培养基可用细橡皮管将清液虹吸到另有容器中,再行分装。加琼脂的培养基经加热沉淀后,可在未冷凝前虹吸上部澄清液入另一容器内然后分装;也可待其凝冻后,将容器周围稍加热,使冻胶外围融化,将整块胶冻倒出后用刀切去底部沉渣部分,再把澄清部分加热融化后,分装。此法可得较透明培养基。(4)保温过滤加有琼脂的培养基,不论用纱布或棉花过滤,都应保持在60℃以上情况下进行,否则易造成琼脂凝固后而不能过滤。最简单易行的方法是,将琼脂培养基盛在锅里,并置火上保温,乘热过滤。也可用特制的保温漏斗加热保温过滤,特别是在天冷时较好。,根据不同的使用目的,使用的量分装到各种不同的容器中。通常使用一个