培养基的制备与灭菌..doc

实训六培养基的制备与灭菌一、实训目标知道培养基的用途,能根据不同微生物和不同培养目的选择培养基类型。学会常用培养基的配制、分装、无菌操作方法。了解高压蒸汽灭菌和干热灭菌的基本原理及应用范围,学会高压蒸汽灭菌和干热灭菌的操作步骤与方法。二、:马铃薯、蔗糖(葡萄糖)、琼脂、可溶性淀粉、牛肉膏、蛋白胨、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O等。:灭菌室、超净工作台或接种箱、恒温箱、烘箱或红外线干燥箱、紫外线灭菌灯、电炉、铝锅、天平、烧杯、量筒、培养皿、高压灭菌锅、pH试纸(~)、试管、三角瓶、铁丝试管筐、试管架、漏斗及漏斗架、玻璃棒、纱布、棉花、牛皮纸、绳、记号笔等。三、实训步骤与要求(一)(PDA)主要用于植物病原菌物的分离和培养,有时也用于植物病原细菌;牛肉膏蛋白胨培养基(NA)主要用于细菌的分离和培养。马铃薯葡萄糖琼脂培养基马铃薯200g葡萄糖20g琼脂17~20*** 1000mL牛肉膏蛋白胨培养基牛肉浸膏3~5g蛋白胨5~~20***(1)称量原料按配方比例准确称量各种原料,马铃薯称重前需洗净去皮。(2)溶化原料制备PDA培养基的马铃薯要切成小块,,用纱布滤去马铃薯残渣,在马铃薯滤液中加入琼脂,继续加热使琼脂完全溶化。注意溶化琼脂过程中要控制火力的大小并不断搅拌,以免溢出或烧焦;待琼脂完全溶化后应补充加热过程中蒸发的水分,以保持溶液的浓度。牛肉膏蛋白胨培养基先将琼脂加水煮至溶化后,再将其他原料溶于水中。(3)调节pHPDA培养基略带酸性,培养菌物一般不需调节pH。~,可用lmol/LNaOH或1mol/LHCl溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。(4)过滤分装趁热用四层纱布过滤培养基,分装至三角瓶时以瓶高的1/3较为合适,分装至试管时培养基的高度不应超过试管高度的1/5。一般试管做斜面培养基的约装5mL,注意培养基不可沾污三角瓶口和试管口。(5)加棉塞分装完毕后,用棉塞堵住管口或瓶口。(6)包扎加塞后,将试管约每10支1捆扎好,在棉塞部分外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳扎好。(7)标记在牛皮纸上用铅笔或玻璃铅笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。(二),以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内;三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染;吸管用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌。:(1)加水打开灭菌锅盖,取出内层灭菌桶,向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。(2)装料放回内层灭菌桶,装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。(3)加盖关闭灭菌器盖,并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,使