平肝潜阳法对高血压模型大鼠下丘脑蛋白质表达的影响..doc

平肝潜阳法对高血压模型大鼠下丘脑蛋白质表达的影响    【摘要】   【目的】 观察平肝潜阳法对高血压肝阳上亢证模型大鼠下丘脑蛋白质表达差异的影响,从蛋白质组学水平探讨其降血压和改善肝阳上亢证症状的分子机制。【方法】选用自发性高血压大鼠(SHR)灌服附子汤法复制高血压肝阳上亢证大鼠模型,以SD大鼠作正常对照,治疗组给予天麻钩藤饮加减方灌胃给药();采用二维凝胶电泳(2DE)分离大鼠下丘脑蛋白质,获得差异表达蛋白质;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOFMS)和数据库分析鉴定差异表达蛋白质。【结果】 高血压肝阳上亢证大鼠模型复制成功,其易激惹程度、饮水量、收缩压等与正常组比较,差异均有显著性意义(P<);治疗组给予中药天麻钩藤饮加减方治疗后,易激惹程度好转,饮水量减少,收缩压下降,与模型组比较差异均有显著性意义(P<)。肝阳上亢模型组蛋白质图谱中有5个蛋白质斑点,与正常组比较表达上升2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达下降2倍及以上;有10个蛋白质斑点表达下降2倍及以上,且同一点在平肝潜阳法治疗组中表达上升2倍及以上。【结论】 平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证的作用可能与下丘脑某些蛋白质的改变有关。 【关键词】  高血压/中药疗法 平肝潜阳法 蛋白质组学 疾病模型 动物 大鼠原发性高血压病(essential hypertension,EH)是一种常见的心血管系统疾病,具有发病率高、并发症多的特点。流行病学研究提示人群高血压病患病率较10年前明显增高[1]。长期高血压病极易导致心、脑、肾等脏器的器质性病变和功能损害,并最终导致这些器官的功能衰竭。肝阳上亢证是高血压病中的常见证型,据统计在高血压病中约占 %[2]。平肝潜阳法是治疗高血压病肝阳上亢证的传统治法,不仅能有效降低患者的血压水平,还可改善患者的生存质量,降低并发症的发生,已有研究从分子、基因等水平探讨其作用机制,取得了有意义的进展[3]。为了进一步从蛋白质水平探讨其作用机制,我们应用差异蛋白质组技术,观察了平肝潜阳法治疗高血压肝阳上亢证大鼠前后下丘脑蛋白质表达谱的变化,现报道如下。     1  材料与方法   动物  正常健康Sprague Dawley(SD)雄性大鼠10只,清洁级,8周龄,体质量(200±10)g,由中南大学湘雅医学院实验动物部提供(医动字第20010 号);自发性高血压大鼠(SHR)20只,雄性,清洁级,8周龄,体质量(200±10)g,由上海斯莱克公司提供〔许可证号:SCXK(沪)20030003〕。   药物制备  附子汤由 60g 单味制附子(由中南大学湘雅医院中药房提供)组成,先将药物浸泡 30 min,煎煮2次后再将药液合并浓缩为含生药  g/mL。天麻钩藤饮加减方:天麻 10g,钩藤 20 g,石决明 30 g,牡蛎 30 g,牛膝 10 g,均由中南大学湘雅医院中药房提供。石决明先煎 20 min,钩藤后下, g/mL。   主要试剂与仪器  2DQuantKit蛋白质定量试剂盒、固相pH梯度干胶条(IPGstrip pH310L,24cm)、IPG Buffer (PH310L)、覆盖液均由Amershan Bios