浅论ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及其意义..doc

浅论ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达及其意义        【摘要】 目的:研究ezrin和merlin基因在胰腺癌细胞中的表达情况及其对胰腺癌细胞生物学行为的影响。方法:应用RTPCR与Westernblotting检测ezrin和merlin基因在胰腺导管上皮细胞及胰腺癌细胞中的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体分别将ezrin和merlin基因转染入SW1990细胞株中,应用MTT实验、流式细胞术、迁移实验和细胞黏附实验观察转染基因对细胞增殖、迁移和黏附能力,细胞周期及凋亡的影响。结果:ezrin和merlin基因在8株细胞中均有不同程度的表达,其表达水平与胰腺癌细胞的分化程度无关。与对照组相比,转染ezrin和merlin基因的SW1990细胞增殖速度缓慢();细胞周期表现为G1期细胞增多,S期细胞减少();细胞与基质的黏附能力明显下降();且转染merlin的SW1990细胞其迁移能力亦有明显降低(),而转染ezrin的SW1990细胞其迁移能力无明显统计学意义的改变()。结论:ezrin和merlin蛋白在胰腺癌细胞增殖、进展过程中可能发挥着负性调节作用。【关键词】 胰腺癌;ezrin基因;merlin基因;增殖;迁移ezrin蛋白是埃兹蛋白、根蛋白和膜突蛋白(ezrinradixinmoesin,ERM)家族成员之一,。人ERM之间有75%~80%的同源性,人merlin与ERM蛋白仅有45%的同源性[1]。ezrin与merlin蛋白主要定位于与细胞骨架重塑有关的区域,如细胞膜的皱褶、动力微丝以及卵裂沟等部位,主要参与上皮细胞中细胞骨架与胞膜之间的连接,具有维持细胞形态和运动、连接黏附分子及调节信号转导等功能。大量研究表明,ezrin蛋白作为近年在肿瘤侵袭和转移研究中的相关蛋白,在很多肿瘤组织中都有异常表达,并与促肿瘤侵袭转移有关。merlin蛋白是第一个被发现具有肿瘤抑制作用的蛋白质,研究发现当其编码基因发生突变时,merlin蛋白失活,其生长抑制功能丧失,最终导致肿瘤的形成。关于ezrin和merlin蛋白在胰腺癌中的研究,国内外报道较少。本实验的研究目的是通过观察ezrin和merlin蛋白在胰腺癌细胞中的表达情况,来探讨它们之间可能存在的关系,以及分别转染野生型ezrin和merlin基因后各自对对方的影响和对肿瘤细胞生物学行为的影响,为以后这两种蛋白的临床应用打下一定的基础。 1材料与方法 、SW1990、PANC1、CAPAN1、CAPAN2、CFPAC1和BXPC3为本实验室所保存,用含有10%胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)的RPMI1640培养基,在37℃、5%CO2培养箱中培养。+HA、+HA+HAmerlin质粒由德国美因茨大学苏占海博士惠赠。 ;逆转录多聚酶链反应(RTPCR)试剂盒购自Toyobo公司;鼠抗人ezrin单克隆抗体购自SantaCruzBiotech公司;兔抗人me