在细菌检测中的应用.ppt

在细菌检测中的应用*一、现有的细菌检测方法及其缺陷*现有的细菌检测方法及其缺陷经典方法初步分类:菌落形态、显微镜检查、以及趋向性试验,如革兰染色、氧化酶和触酶。鉴定属或种:以细菌生长代谢过程为基础的特征性的生理生化反应、选择培养基生长情况。缺陷虽然某些生化试验只需要数分钟即可完成,但对于绝大多数经过转种、培养的微生物标本,通常要得到一个完整的鉴定报告大约要24-48h,某些苛氧菌或生长慢的细菌则耗时更多。操作繁琐、主观性强。*(16SrRNA)基因序列分析:rRNA寡核苷酸序列是细胞中最稳定的序列,比DNA稳定的多。细菌中有三种rRNA,23S、16S和5S,其中16SrRNA因其核苷酸数目适中、信息量大、具有高度稳定性、易于提取和分析而成为理想的细菌鉴定的研究对象。通过分析比较细菌rRNA序列的相关性确定细菌种系的发生关系。*:鸟嘌呤加胞嘧啶碱基比例的测定(G+Cmol%),核酸的分子杂交实时荧光定量PCR缺陷:技术复杂、耗费高、假阳性率高、不能自动化、高通量。不适合临床常规检测!*迫切需要找到一种新的病原微生物快速诊断的方法,以满足临床需要*现有的细菌检测方法及其缺陷二、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱*(一)质谱的基本概念*质谱的基本概念质谱法(MassSpectrometry,MS):定义:用电场和磁场将运动的离子(带电荷的原子、分子或分子碎片,)按它们的质荷比分离后进行检测的方法。没有两个核素的质量是一样的,也没有一种核素的质量恰好是另一种核素质量的整数倍。分析这些离子可获得化合物的分子量、化学结构、裂解规律等信息。*