电镜样品制备与观察.ppt

主要内容样品的取材与固定样品的渗透与包埋修快与支持膜的制备玻璃刀的制作与超薄切片电子染色电子显微镜的使用与生物样品超微结构观察一、样品的取材与固定(一)实验目的1掌握电镜样品取材的方法与要求2掌握电镜样品的固定方法与要求(二)实验原理(见原理部分)(三)实验材料小白鼠肝脏(等)(四)实验方法1动物麻醉将小白鼠放入烧杯,放入一蘸有***仿的脱脂棉球,用培养皿盖住烧杯口,约3~5min后小白鼠被麻醉;2解剖分割迅速解剖,取出肝脏,**,迅速投入准备号的固定液;%戊二醛0~4℃固定1~2h(固定液需提前准备号);,每次5~10min,0~4℃;5后固定1%鋨酸固定1~2h,0~4℃;,每次5~10min,0~4℃;7脱水30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇,0~4℃,每步5~10min;8保存70%乙醇0~4℃保存。(五)实验要求1用具干燥;2取材快、准、小、轻;3鋨酸有毒,需在通风厨中进行,含鋨酸的废液放入指定容器;4每人固定2~3块样品;5在固定的过程中要不断震动样品管。二、样品的渗透与包埋(一)实验目的掌握超薄切片样品渗透与包埋的方法(二)实验原理见理论部分(三)实验材料上次保存的材料(四)实验方法1脱水85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇,每步5~10min;2置换***→***,每步5~10min;3渗透1/2***+1/2环氧树脂1~4h;4包埋先将包埋模块加满环氧树脂,再将渗透过的材料用牙签挑到包埋模块尖端部分,并在其中渗透3~4h;5聚合加热37℃→45℃→60℃,各12h。(五)实验要求1所用器具、工具保持清洁干燥;2手上若沾有环氧树脂,用***棉球擦去;每人包埋2~3个样品块。三、修快与支持膜的制备(一)实验目的1掌握超薄切片包埋块修快的方法;2掌握支持膜制备的方法。(二)实验原理见理论部分(三)实验材料上次实验包埋的材料(四)实验方法1修快(1)用样品夹头夹住环氧树脂包埋块的2/3左右,夹紧,或用手拿住样品块;(2)用小钢锉或单面刀片修快使达到下面要求:切面光滑平整,尽可能是要观察的材料,*;3~4个斜面的坡度以45度为宜。