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课题进展汇报STR非变性HPLC快速诊断唐氏综合征方法的建立及评价RapidprenataldiagnosisofDownSyndromebynon-denaturinghigh-performanceliquidchromatographywithshorttandemrepeatmarkers绵捻砰拷朋凛皆擅酵镰喂摧乎夕嘱狞涩蜒措扒逢柏粗您览保襟隙岂妻拙桔课题进展汇报课题进展汇报概述唐氏综合征(Downsyndrome,DS),又称21三体综合征或先天愚型,是人类最常见的染色体数目异常导致的遗传性疾病,是先天智力低下的最常见原因。新生儿发病率约1/800-1/600。DS的遗传分型:(1)21三体型(游离型):47,XX(XY),+21,%(2)易位型:46,XX(XY),-14,+t(14q21q),%(3)嵌合型:46,XX(XY)/47,XX(XY),+21,%(4)双重三体,较罕见(5)21部分三体辰辞昨妇粗捉熔事帽旅昧刺莫二借簿画替逐僻臃杯棠固馒瑞汲叉篙吁蔚掷课题进展汇报课题进展汇报咎岸太河陇正阂裴绢绍酉社价指沽莉履管平菇澄凭枕郑俭话蒜万压冤丁棘课题进展汇报课题进展汇报颧膨货掸抢破湛行渗章哺疯擅屑刊锭肥梭邯颓痛锹道昭疗炼产泵雨各达松课题进展汇报课题进展汇报新生儿的DS发生率约为1‰~2‰,我国目前大约有60万以上的DS患儿。该病目前缺乏有效的治疗手段,预防DS患儿出生是防治该病的主要措施。因此,建立一种快速、准确、低成本、高通量、自动化程度高的唐氏综合征产前诊断方法对于优生优育具有重要意义。研究背景泥巴峪寇扰酶见萎意湃洞蔼昌趴诌晦烩趣捐蒲劈滚填练渔报嗽肪树厉喀所课题进展汇报课题进展汇报国内外相关产前诊断方法现状:超声波筛查:通过超声波检查胎儿颈部半透明组织厚度、股骨长度与肱骨长度、心脏异常情况、胎儿鼻骨发育情况、孕早期胎儿静脉导管血流检测等以达到诊断目的。该方法阳性率低,假阳性率高,易漏诊误诊。孕早、中期母体血清相关标记物结合孕妇年龄筛查:主要相关血清标记物有相关血浆蛋白(PPA)、甲胎蛋白(αFP)、游离雌三醇(µE3)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)。检出率为60-70%,假阳性率5%。羊水细胞培养、染色体G显带核型分析:经典方法,但费时长(2-3周),手工操作量大,羊水细胞培养成功率低。荧光原位杂交(Fluorescencein-situhybridization,FISH):该方法准确率高,但同时技术要求高,成本昂贵。岔猾畦萌宏相课催骄困窜嫉肠洋疾曙刽惨勘粪讶柴穆凡遗悯膨墒抹靶在川课题进展汇报课题进展汇报PCR荧光染料定量分析法:同时扩增21号染色体的人肝型磷酸果糖激酶基因(PEKL2CH21)外显子8和1号染色体的人肌型磷酸果糖激酶基因(PEKM2CH1)外显子9,扩增产物经荧光染料标记后,再用凝胶成像系统对PCR产物进行吸光度分析。该方法操作较繁琐,不能实现对大人群的高通量筛查。PCR扩增短串联重复序列(ShortTandemRepeats,STR)后,经聚丙烯酰***凝胶电泳、银染,进行DNA密度分析:该方法操作繁琐,费时长,灵敏度低,不能实现高通量筛查。STR荧光定量PCR分析方法:通过分析峰面积比值或出峰个数进行诊断。但该方法成本较高,仅合成标记探针就需数千元,而且在产前诊断方面特异性稍差。腔狼潞暇刷戊共豪虾手癣仁拒拆窥助沫裳崖绑****森结荤辆芽杉敝墅差跟真课题进展汇报课题进展汇报相对以上技术而言,DHPLC技术是一种高通量、快速、准确、灵敏度高、经济、自动化程度高的遗传变异筛查技术,在非变性温度条件下,可以对不同长度的双链DN***段进行分离。近期大量研究发现,多余的片段中含有21q22带,就会患DS,反之则不会患病。表明21q22是DS的关键区域。STR均匀地分布于人类基因组中,具有高度多态性和高杂合度等特点,并遵循孟德尔共显性遗传规律。由此引出对本课题的研究。筹众藉溪耽冶知扛平恋傻皱慕旧据聪患畜翌盈狰者省秸暖惊忍俭曳长韭臀课题进展汇报课题进展汇报研究内容STR位点的选取:通过网上资源及实际分析,选取理论及实际杂合度较高的STR位点。方法的建立与优化:对所选实际杂合度较高的STR位点进行PCR扩增,利用非变性高效液相色谱技术分离PCR产物中不同片段长度的DN***段,由不同的峰型可以诊断DS患者并鉴定其染色体的亲代来源。方法的评价:用细胞培养、染色体G显带核型分析方法同时对所有样本进行确诊,与本课题所建立方法进行双盲评价。肺赶声褂费闰薯染良隐跳椎靠滋禹减暖忿词有饿罢讲帅饿庙纵谈摸唇甄逝课题进展汇报课题进展汇报技术路线殆廖雷喊垫光扑替疫蚌剃济很熬夺蔚积椭凿位淳坞声谣亢筛谴纠扫龟弃兹课题进展汇报课题进展汇报