质粒种类和应用PPT讲座.ppt

基因载体是一类能自我复制的DNA分子,其中的一段DNA被切除而不影响其复制,可用以置换或插入外源(目的)DNA而将目的DNA带入宿主细胞。常用的载体有质粒、噬菌体、病毒等基因工程载体的构建必需应用表达调控的基本理论知识,应用已知的调控序列进行重组、改造。基因载体应具备的条件:(1)有多种限制性内切酶切点,但每种切口最好只有1个;(2)有选择标记,例如抗药性标记,蓝白斑试验;(3)有一定容量;(4)有相当的抄本数,即每个宿主菌可能容纳的最多数。多克隆位点ori复制起始点遗传标记Amppolylinker基因载体载体的功能及特征载体的功能运送外源基因高效转入受体细胞为外源基因提供复制能力或整合能力为外源基因的扩增或表达提供必要的条件载体的功能及特征载体应具备的条件具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)具有合适的筛选标记具有较高的外源DNA的载装能力具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点质粒(plasmid)Plasmid独立于细菌染色体外的双链环DNA分子。  Plasmidchromosome质粒质粒的基本特征质粒是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子质粒常见于原核细菌和真菌中绝大多数的质粒是DNA型的绝大多数的天然DNA质粒具有共价、封闭、环状的分子结构,DNA质粒DNA的分子量范围:1-300kb质粒质粒的基本特征质粒的自主复制性质粒能利用寄主细胞的DNA复制系统进行自主复制质粒DNA上的复制子结构决定了质粒与寄主的对应关系根据在每个细胞中的分子数(拷贝数)多寡,质粒可分为两大复制类型:严紧型复制控制的质粒1-3拷贝stringentplasmid松弛型复制控制的质粒10-60拷贝stringentplasmid