流式细胞仪操作规程.doc

名称:流式细胞仪操作规程关键词:流式细胞仪目的:流式细胞仪开机程序、预设获取模式文件、设定和调整、样品分析、,打开电源,稳定5分钟。,倒掉废液,并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS或FACSFlow),合上压力阀。确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。排出过滤器内的气泡。,打开打印机电源。,等待屏幕显示出标准的苹果标志。,以排除Flowcell中的气泡。,先用FACAFlow或PBS进行HIGHRUN约2分钟。做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。(AcquisitionTemplateFiles),可利用此视窗编辑一个获取模式文件。,绘出一个或多个DotPlots(点图)。从DotPlot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x轴和y轴参数。,同上法可绘出Histogram(直方图)。\BDApplications\CELLQuestFolder\EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStationG3\BDΞApplications\CELLQuest\EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测,EXP用于细胞表面标志分析。,进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。,选取ConnecttoCytometer(快捷键:+B)进行电脑和仪器的连机。将出现的AcquisitonControl对话框移至合适位置。,开启Detectors/Amps、pensation、Status等四个对话框,并将它们移至屏幕右方,以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1,2,3,4获得此四个对话框。,先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifiermode):线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时,FSC和SSC多以线性模式Lin测量,且DDMParam选择FL2,而FL1,FL2与FL3则以对数模式Log测量;分析细胞DNA含量时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3皆以Lin进行测量,且DDMParam选择FL2;分析血小板表型时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3等均以Log进行测量。,将流式细胞仪设定于RUN,流速可在HIGH或LOW上。