成年SD大鼠心肌细胞分离及其胞内钙离子动态变化测定.doc

成年SD大鼠心肌细胞分离及其胞内钙离子动态变化测定        【摘要】 目的:建立稳定的成年SD大鼠心肌单细胞分离方法,并对心肌细胞内Ca2+动态变化进行测定。方法:用改进的Langendorff装置,行大鼠主动脉插管逆向灌流(温度、pH、水质恒定),用混合液(Ⅱ++1mg/mL牛血清白蛋白)消化心脏,经3次不同浓度含钙台式液复钙后得到钙稳态心肌细胞;室温静置1~2h后于激光共聚焦显微镜下测定Ca2+的动态变化。结果:得到70%~90%长杆状活细胞,钙稳态心肌细胞可占40%~60%;fluo_4 AM负载染色后可记录到典型的诱发钙瞬变。结论:胶原酶和蛋白酶混合液主动脉逆向灌流方法可以得到具有正常生理功能的钙稳态心肌细胞,可用于心肌细胞内钙信号研究。【关键词】 大鼠心肌细胞细胞分离激光共聚焦显微镜 CardiomyocyteIsolationfromAdultSDRatHeartforConfocalMicroscopicIntracellularCa2+Imaging [Abstract]Objective:TodevelopastablemethodforadultSDratsinglecardiomyocyteisolation,heintracellularCa2+:Ratheartwasdigestedbyaortaretrogradeperfusionwithmixture[collagenaseⅡ(),pronase()andbovineserumalbumin(1mg/mL)],++imagingafterstorageatroomtemperaturefor1~:Therewereabout70%~90%rod_shapedfreshviablecells,inwhich40%~60%:AortaretrogradeperfusionwithcollagenaseⅡandpronaseisapropermethodtoprocuresinglecalciumhomeo